Caracterização de toxinas pré-sinápticas da peçonha da coral Micrurus lemniscatus lemniscatus

Resumo

As peçonhas de serpentes do gênero Micrurus (corais) são conhecidas principalmente por sua neurotoxicidade, que é mediada principalmente por alfa-neurotoxinas com ação pós-sináptica e beta-neurotoxinas (fosfolipases (PLA2) neurotóxicas) com ação pré-sináptica. Dentre as espécies de Micrurus cuja neurotoxicidade tem sido estudada, a M. lemniscatus lemniscatus se destaca pela sua forte ação pré-sináptica. Entretanto, com exceção dos trabalhos iniciais de caracterização farmacológica usando peçonha bruta, pouco se tem investigado da ação neuromuscular desta espécie. Neste projeto, propomos isolar e caracterizar as neurotoxinas pré-sinápticas da peçonha de M. l. lemniscatus através de cromatografia RP-HPLC, seguido por identificação das toxinas por sequenciamento (espectrometria de massas), pela avaliação da atividade PLA2 e pelo bloqueio neuromuscular em nervo frênico-diafragma de camundongo. Os mecanismos envolvidos no bloqueio causado pela(s) principal(ais) neurotoxina(s) serão avaliados usando uma variedade de abordagens eletrofisiológicas (registros de potencial de membrana, de placa terminal, e intracelulares - estes através de patch-clamp; registros extracelulares de potencial de ação composto e ondas perineurais) em conjunto com avaliação da mobilização de Ca2+ intracelular, análises histológicas e avaliação imunohistoquímica da expressão e distribuição de proteínas envolvidas na exocitose. Também será avaliada a ação hemodinâmica (pressão arterial, frequência respiratória), cardíaca (átrio isolado) e vascular (aorta torácica) das toxinas isoladas. Os resultados deste estudo ajudarão a entender melhor os mecanismos da neurotoxicidade pré-sináptica desta peçonha.