Caracterização funcional de proteínas de interação das diferentes isoformas de S6Ks

Resumo

A via de sinalização da mTOR vem sendo relacionada a várias doenças e desordens metabólicas em humanos, incluindo obesidade, diabetes e vários tipos de câncer. As proteínas S6Ks têm mostrado importante papel na sinalização da mTOR, funcionando como efetoras dessa via, mas as diferenças funcionais de suas diferentes isoformas é uma questão ainda em aberto. A família das S6Ks é composta por dois genes, a S6K1 e S6K2, e as seguintes isoformas serão usadas neste estudo: p70-S6K1, p85-S6K1 e p54-S6K2. O objetivo do presente estudo será caracterizar funcionalmente as diferentes proteínas de interação das isoformas de S6K. Para tanto, as proteínas p70-S6K1, p85-S6K1 e p54-S6K2 serão super-expressas em células humanas HEK293, imunoprecipitadas, e diferentes parceiros de interação destas isoformas serão identificados por espectometria de massas. Além disso, pretendemos no presente projeto identificar o papel da interação entre essas proteínas e as S6Ks, olhando para sítios de fosforilação das proteínas-alvo, nível de ativação de S6Ks pela modulação das proteínas de interação e para a natureza bioquímica da interação que ocorre entre elas.