Envolvimento da via de sonic hedgehog na sinalização parácrina entre fibroblastos e osteoblastos

Resumo

Sabe-se que a remodelação óssea é um processo dinâmico e responsável pela manutenção das características anatômicas e funcionais do osso. Do ponto de vista biomédico, há uma necessidade urgente de compreender sua regulação, sobretudo cercando mecanismos intercelulares, os quais podem acontecer de maneira parácrina. Assim, o objetivo geral deste projeto será investigar se a via de Sonic Hedgehog (Shh) está envolvida em respostas cruzadas entre fibroblastos e osteoblastos, verificando se os fibroblastos afetam osteoblastos de maneira parácrina. Trata-se de uma via envolvida com mecanismos morfogenéticos a qual garante o perfeito desenvolvimento dos tecidos durante a organogênese e, neste cenário, acreditamos estar envolvida na regulação da atividade de osteoblastos durante mecanismos de remodelação tecidual. A escolha desta via pelo grupo se justifica pelo seu envolvimento durante a diferenciação de osteoblastos; no entanto, não se sabe se seus efeitos são autócrinos e/ou parácrinos, e se fibroblastos auxiliam neste processo. Para responder a esta questão, fibroblastos serão cultivados e, após 3 dias de cultivo o meio condicionado será coletado e usado para tratar osteoblastos. Osteoblastos em semi-confluência serão tratados ou não com meio condicionado de fibroblastos e avaliados quanto: 1. Seu efeito citotóxico (MTT); 2. Seu efeito na adesão celular (cristal Violeta); 3. Seu efeito na expressão de proteínas envolvidas com a via de Shh e adesão (Patched, Shh, Gli-1, SuFu e FAK); 4. Sua capacidade em estimular a diferenciação celular e mineralização in vitro (fosfatase alcalina e vermelho de alizarina, respectivamente). Esperamos que o fruto deste projeto possa trazer mais compreensão acerca dos mecanismos que regem a diferenciação de osteoblastos, servindo-lhes com novas informações ao combate de patologias que acometem o tecido.