Clonagem e caracterização de enzimas epóxido hidrolases de Trichoderma reesei

Resumo

As enzimas são importantes moléculas biológicas amplamente estudadas e utilizadas em atividades econômicas. Enzimas epóxido hidrolases catalisam a hidrólise de epóxidos a seus correspondentes dióis, e diversos estudos demonstram seu grande potencial para aplicação biotecnológica em processos industriais e de biorremediação. Neste projeto são descritas as etapas já concluídas no período de mestrado, como a identificação e caracterização de dois genes codificadores de enzimas epóxido hidrolases (TrEH 1 e TrEH 2) do fungo Trichoderma reesei, bem como a clonagem no vetor de expressão pProEX-HTa (Life Technologies, USA), expressão em Escherichia coli BL 21, e purificação da enzima epóxido hidrolase 2 (TrEH 2). Os ensaios preliminares desenvolvidos demonstram atividade enzimática e enantioseletividade sobre o substrato óxido de estireno (epóxido). Para a continuidade do projeto (doutorado direto) propõe-se a expressão e purificação da proteína recombinante TrEH 1 e com as duas enzimas (TrEH 1 e TrEH2), pretende-se realizar a caracterização cinético-enzimática, testes de determinação da enantioseletividade por cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e predições estruturais. Esta proposta é pioneira na descrição e caracterização das enzimas epóxido hidrolases do fungo Trichoderma reesei. (AU)