Desenvolvimento e caracterização de mutante ”PbKU70 para o fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis

Resumo

Os fungos termodimórficos do gênero Paracoccidioides são os causadores da paracoccidioidomicose (PCM), uma doença que afeta principalmente trabalhadores de áreas rurais. A PCM é uma doença com grande potencial incapacitante para o trabalho e fatores de virulência específicos do agente etiológico ainda são pouco conhecidos. Trabalhos recentes vêm desvendando fatores de virulência de fungos do gênero por meio da tecnologia de RNA antisense. Embora de grande valia, o silenciamento de um gene não assegura o papel causal do gene sobre o fenótipo observado. Para estabelecer uma relação causal entre o gene e seu respectivo fenótipo, habitualmente, é necessário eliminar por completo o produto gênico e observar o fenótipo adquirido. Infortunadamente, estratégias convencionais de knockout gênico tem pouca efetividade em fungos do gênero Paracoccidioides. Uma estratégia que vem se mostrando útil para solucionar problemas semelhantes em outros micro-organismos é a indução de integração homóloga por meio da redução da expressão do gene KU70e/ou KU80 envolvidos na via de junção de extremidades não homólogas de DNA. Mutantes com elevadas taxas de integração homóloga têm sido adquiridos por meio deste procedimento. A base de dados do genoma do fungo Paracoccidioides brasiliensis possui anotação para o gene KU70, o que o torna um alvo potencial para a estratégia. Assim, o presente trabalho tem por objetivo silenciar o gene KU70 de P. brasiliensis para estabelecer uma linhagem mutante que sirva como background genético para estudos de knockout de outros genes. Com a possibilidade de realizar knockouts em genes de P. brasiliensis os estudos funcionais de genes responsáveis por codificar fatores de virulência e de resistência aos diversos tipos de estresse infligidos por células do hospedeiro se tornam mais factíveis. (AU)