Mecanismos moleculares da RhoGAP ARHGAP21 na formação de vesículas de VLDL em hepatócitos de camundongos C57BL/6 heterozigotos para ARHGAP21

Resumo

A ARHGAP21 controla múltiplas funções celulares, como migração, proliferação, diferenciação e tráfego intracelular de vesículas. A ARHGAP21 é parceira molecular das GTPases ARFs, que controlam a formação de vesículas a partir do Golgi. Nosso modelo animal ARHGAP21-heterozigoto (Het, 50% da expressão da proteína) tratado com a dieta hiperlipídica (HFD) apresentou conteúdo elevado de triglicérides no fígado, comparado ao animal C57BL/6 alimentado com a mesma dieta. A HFD favoreceu acúmulo de lípides no animal Het, mas não sabemos como a redução no conteúdo da ARHGAP21 in vivo foi capaz de gerar maior esteatose hepática neste animal. Assim, há a possibilidade de que a ARHGAP21 esteja envolvida com os mecanismos que controlam a lipogênese ou secreção de lípides do fígado. Neste trabalho, utilizando camundongos C57BL/6 heterozigotos para a ARHGAP21 e alimentados com a dieta hiperlipídica, serão avaliados conteúdo gênico e proteico das proteínas ligadas a lipogênese, através de q-PCR e Western Blotting, respectivamente; acúmulo lipídico através de método colorimétrico-enzimático e oil red; interação entre as ARFs e ARHGAP21 através de ensaio de imunoprecipitação, bem como co-localização através de imunofluorescência e microscopia confocal; apoptose será avaliada através de citometria de fluxo; e sinalização da insulina será mensurada através da fosforilação da AKT em serina. Os grupos serão analisados pelo teste ANOVA two-way seguido de pós-teste de Bonferroni para avaliação da significância dos resultados. Considerando a participação essencial do fígado na dislipidemia associada ao excesso nutricional, este projeto tem como objetivo investigar a possível participação da ARHGAP21 na formação de vesículas de VLDL em hepatócitos de camundongos C57BL/6 normais e Het submetidos a HFD. Este projeto trará contribuições acerca do entendimento dos mecanismos moleculares que levam ao acúmulo de lípides hepáticos, bem como potencial elucidação das vias de sinalização das quais a ARHGAP21 participa.