Explorando a importância biológica da Raf Kinase inhibitor (RKIP) nos tumores estromais gastrointestinais (GIST).

Resumo

Os GIST sao tumores mesenquimais mais comuns do trato gastrointestinal. São caracterizados pela presença de mutac'oes ativantes dos oncogenes KIT/PDGFRA, induzem ativac'ao constitutiva das vias de proliferac'ao e sobrevivencia celular, e por isso são alvos do tratamento molecular dirigido através dos fármacos imatinibe, sunitibe e regorafenibe. Nosso grupo previamente identificou um importante fator de prognóstico em GIST, a proteína raf kinase inhibitor protein (RKIP), cuja perda de expressão ocorre em cerca de 17% dos GIST. Resultados preliminares do nosso grupo evidenciaram que o silenciamento de RKIP em linhagem de GIST não promove alteração da expressão da proteína ERK e neste sentido outras vias de sinalização podem estar agindo de forma compensatória. Somada a isso, estudos mostram que as terapias imatinibe e sunitibe podem modular o microambiente tumoral que também é influenciado pela RKIP. Inserido neste contexto, o objetivo do presente trabalho é elucidar o impacto biológico e terapêutico do silenciamento de RKIP em GIST. Além disso, a interação do microambiente tumoral e terapia alvo, assim como a importância do silenciamento de RKIP neste processos também serão estudadas. A avaliação da expressão diferencial de um painel de genes envolvidos no câncer será feito na plataforma Nanostring. Análises proteômicas serão realizadas para identificação das proteínas diferencialmente expressas nas linhagens tumorais. A validação das principais proteínas diferencialmente expressas será feita em uma série de pacientes com GIST pela técnica de imunohistoquímica. Em seguida, o impacto biológico e terapêutico do silencimento de RKIP será avaliado in vitro e in vivo. Iremos ainda estabelecer co-cultura de macrófagos com as células de GIST e avaliar o impacto biológico e terapêutico do silenciamento de RKIP associado ao microambiente tumoral in vitro e in vivo. Finalmente, as linhagens de GIST serão tratadas com a dose IC50 do imatinib, sunitinib e regorafenibe para posterior avaliação do impacto terapêutico in vitro e in vivo.