Estudo do efeito genotóxico, do potencial de membrana e das vias de morte celular da curcumina na terapia fotodinâmica em promastigota e amastigota de L. major e L. braziliensis: estudo in vitro

Resumo

As Leishmaniases são doenças infecciosas causadas por protozoários do gênero Leishmania que apresentam duas formas evolutivas: uma forma flagelada, a promastigota, responsável pela infecção e uma forma aflagelada, a amastigota forma em que o parasita se multiplica no hospedeiro vertebrado. A doença pode se manifestar nas formas cutânea, muco-cutânea, ou visceral, sendo essa última a forma mais grave da doença. A Leishmaniose tegumentar está presente em 80 países, é considerado pela Organização Mundial de Saúde um problema de saúde pública, com uma estimativa de 65.000 novos casos por ano no Brasil, sendo o país com maior prevalência da doença no continente americano. O tratamento convencional é realizado com Antimoniais pentavalentes, Pentamidinas e antibióticos, no entanto são tratamentos agressivos ao paciente e que causam efeitos colaterais como náuseas, vômito e mialgia. A terapia fotodinâmica associa uma substância fotossensível, fonte de luz e oxigênio molecular para induzir a formação de espécies reativas de oxigênio induzindo a inviabilização das células alvo por apoptose. É uma alternativa atraente para o tratamento da forma cutânea pela seletividade do campo de tratamento, tornando possível tratar as lesões individualmente, sem o impacto que as drogas administradas sistemicamente apresentam. O objetivo deste projeto será avaliar o efeito genotóxico da TFD com Curcumina em promastigotas e amastigota de Leishmania major e Leishmania braziliensis, por meio do Ensaio do cometa, verificar a presença de apoptose e necrose induzida pela TFD, pelo ensaio com Anexina V e iodeto de propídio e avaliar alterações no potencial de membrana mitocondrial utilizando rodamina trimetilada ou rodamina 123, além de verificar a cinética de internalização da curcumina com microscopia confocal e avaliar a expressão dos genes mitocondriais LBRM_30_3630 (putative ATP synthase, epsilon chain) e LMJF_25_1180 (putative ATPase beta subunit) e a expressão do gene F0F1-ATP synthase (Complex V), pela técnica de PCR quantitativa e tempo real. (AU)