Desenvolvimento de formulações probióticas para a prevenção da candidose bucal: Estudo in vitro e in vivo

Resumo

A candidose representa a principal infecção fúngica da cavidade bucal e o aumento da resistência aos antifúngicos por Candida spp. tem levado à busca por agentes antimicrobianos alternativos, como os probióticos. Em estudo prévio do nosso grupo de pesquisa, foi verificado que entre diversas cepas de Lactobacillus isoladas da cavidade bucal, a cepa de Lactobacillus paracasei 28.4 mostrou a maior capacidade de inibir C. albicans e reduzir o desenvolvimento de candidose. Assim, o objetivo desse projeto será desenvolver formulações probióticas com a cepa de L. paracasei 28.4 para aplicação local na cavidade bucal e testar seu potencial como agente de prevenção e controle da candidose. Para o preparo das formulações, L. paracasei 28.4 será incorporada em diferentes concentrações de hidrogéis usando gellan gum. A seguir, as formulações serão avaliadas quanto ao número de células viáveis de L. paracasei e às diferentes formas de armazenamento, incluindo liofilização e temperaturas de estocagem. Além disso, a capacidade das formulações probióticas em inibir o crescimento in vitro de C. albicans será avaliada pelo método de difusão em ágar, formação de biofilme e ensaios de filamentação. O teste de difusão em ágar será realizado em meio de cultura extrato de levedura, peptona, dextrose (YPD). Os biofilmes serão formados em corpos de prova de resina acrílica e avaliados por meio da contagem de células viáveis, análise da biomassa total e microscopia eletrônica de varredura. A filamentação de C. albicans será induzida em placas de 24 poços e quantificadas em microscópio óptico. A seguir, as formulações serão testadas na cavidade bucal de camundongos saudáveis procurando-se avaliar o sistema de entrega e a colonização oral por L. paracasei 28.4, utilizando-se das técnicas de recuperação de UFC/mL e quantificação por PCR real time. A formulação que apresentar melhores resultados nos estudos in vitro e no sistema de entrega na cavidade oral de camundongos saudáveis, será testada em camundongos com candidose oral experimental induzida por imunossupressão. Os efeitos da formulação probiótica na candidose bucal serão avaliados pela contagem de células viáveis de Candida spp. e Lactobacillus spp., quantificação de L. paracasei 28.4 e C. albicans por PCR real time, determinação das lesões macroscópicas de candidose no dorso da língua e análise das lesões histológicas. Além disso, será realizado um estudo de monitoramento do desenvolvimento da candidose bucal em tempo real, utilizando-se o método inovador de imagens de bioluminescência em IVIS Lumina. Os dados obtidos serão submetidos a uma análise exploratória para a seleção do teste estatístico mais adequado para cada experimento. Em todos os testes será utilizado o programa GraphPad Prism, considerando-se nível de significância de 5%.