Interações biofisicoquímicas na nanobiointerface: a influência das características superficiais e da presença de coroa protéica no processo de internalização celular de nanomateriais

Resumo

O projeto proposto se insere na grande área de "colóides e interfaces" e tem como objetivo central a verificação do papel das características superficiais de nanopartículas poliméricas no processo de internalização celular. A primeira etapa prevê a fabricação de nanopartículas poliméricas produzidas a partir de copolímeros em bloco biocompatíveis e sensíveis ao pH (PEOm-b-PDPAn, PMPCm-b-PDPAn e PHPMAm-b-PDPAn). A dinâmica, estrutura e morfologia das entidades nanométricas serão detalhadamente investigadas por técnicas de espalhamento de luz (dinâmico - DLS, estático - SLS e eletroforético - ELS) além de microscopia eletrônica de transmissão (TEM). Na sequencia, a influência das características estruturais e superficiais das NPs no processo de internalização celular será experimentalmente investigada utilizando-se as técnicas de microscopia de fluorescência confocal (LSCM) e citometria de fluxo (FACS). Na Segunda etapa do cronograma proposto para o projeto, as nanopartículas poliméricas biodegradáveis serão incubadas em ambiente plasmático e posteriormente se identificará e quantificará as proteínas formadoras da coroa proteica em cada caso. Está etapa será essencialmente conduzida utilizando-se as técnicas de centrifugação, eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa (LC-MS). Estas medidas serão complementadas com experimentos de correlação de fluorescência resolvida no tempo (FLCS) com o objetivo de se avaliar a adsorção da proteína mais abundante do plasma humano (albumina humana - HSA) sobre a superfície das nanopartículas produzidas. O objetivo central deste projeto é compreender como a natureza físico-química da superfície dos sistemas nanoestruturados e a presença de coroa proteica influenciam o processo de internalização celular.Na Segunda etapa do cronograma proposto para o projeto, as nanopartículas poliméricas biodegradáveis serão incubadas em ambiente plasmático e posteriormente se identificará e quantificará as proteínas formadoras da coroa proteica em cada caso. Está etapa será essencialmente conduzida utilizando-se as técnicas de centrifugação, eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa (LC-MS). Estas medidas serão complementadas com experimentos de correlação de fluorescência resolvida no tempo (FLCS) com o objetivo de se avaliar a adsorção da proteína mais abundante do plasma humano (albumina humana - HSA) sobre a superfície das nanopartículas produzidas. O objetivo central deste projeto é compreender como a natureza da superfície dos sistemas nanoestruturados e a presença de coroa proteica influenciam o processo de internalização celular. (AU)