Papel biológico de RUNX1, Akt, COX-2 e metaloproteinases no mecanismo de metástase em melanomas

Resumo

O melanoma cutâneo é uma neoplasia maligna dos melanócitos conhecida pelo seu comportamento clínico agressivo e principalmente pela alta propensão para disseminação metastática, o que resulta em um pior prognóstico. Como esta neoplasia apresenta um curso clínico muito variado, pacientes com a forma não metastática da doença (estágios I e II) apresenta um índice de sobrevida global de 97-53% em 5 anos, no entanto, em pacientes com melanoma metastático (MM) esse índice varia de 20-15% no mesmo período. Nesse sentido, ultimamente tem ocorrido uma intensa busca por biomarcadores com valor prognóstico em MM e de vias moleculares que auxiliem para determinar um tratamento mais específico para pacientes diagnosticados em estágios tardios. Muitas moléculas têm sido apontadas como críticas no processo de invasão (e metástase), dentre elas a proteína Akt que tem sido relacionada com os processos de sobrevivência e migração celular. Estudos recentes indicam que o fator de transcrição RUNX1 ativa PI3K, que consequentemente fosforila Akt, ativando-a; por outro lado, quando o gene do Akt é silenciado as células apresentam reduzida capacidade de invasão e migração em diversos tipos de tumores. Acredita-se que a via do Akt regula positivamente a expressão de Ciclooxigenase-2 (COX-2), que por sua vez está associado a um fenótipo mais agressivo nos tumores, inclusive por ativação de metaloproteinases da matriz, especialmente MMP-2 e MMP-9. Considerando esses aspectos, nós pretendemos estudar a expressão de Akt, COX-2, RUNX1 e MMPs em espécimes parafinados de melanomas primários com e sem história de metástase por meio da técnica imunohistoquímica. As lâminas serão escaneadas e analisadas por meio de algoritmos específicos para quantificação da intensidade de marcação. Adicionalmente, será investigado o papel biológico e efeito do silenciamento do gene do Akt em células B16F10, por meio de ensaios in vitro para determinação das taxas de morte celular (necrose e apoptose), viabilidade, proliferação, migração e invasão celular. No modelo in vivo, células B16F10 (silenciadas ou não para o gene do Akt) serão injetadas na língua de camundongos C57BL/6 e será realizada a análise cronológica dos eventos histológicos e biológicos que ocorrem durante o processo metastático. (AU)