Investigação dos mecanismos moleculares induzidos por vetores nanoestruturados para transfecção de genes em culturas tumorais esferoides

Resumo

O câncer de mama ocupa a segunda posição em incidência e mortalidade entre o sexo feminino e segundo órgãos nacionais e internacionais esse número tem aumentado nos últimos anos. O desenvolvimento de novas terapias para o tratamento do câncer é necessário devido a esse crescente número casos e a dificuldade de tratamentos efetivos. Dentre os mecanismos moleculares envolvidos na biologia tumoral destaca-se a via Wnt e do fator de crescimento transformador ² (TGF-²), responsáveis pela regulação dos processos de proliferação e diferenciação celular e, quando há superexpressão promovem a tumorigênese. Uma estratégia para afetar as duas vias de sinalização é através da edição gênica por CRISPR/Cas9 do fator transformador de interação com o crescimento (TGIF) que atua aumentando a sinalização celular em tumores de mama triplo negativos (TNBC) o que resulta em mau prognóstico clínico das pacientes. No entanto, a entrega de ácidos nucléicos para interior das células é dificultada pela membrana plasmática, necessitando vetores de carreamento. Nos últimos anos, a nanotecnologia mostrou excelência nas propriedades de proteção e entrega de moléculas, destacando-se as nanopartículas lipídicas sólidas (NLS), isso porque além da entrega eficiente de genes, sua estrutura possui componentes lipídicos biocompatíveis. Estudos sobre os mecanismos biológicos e os efeitos desencadeados por nanopartículas (NP) estão sendo cada vez mais requeridos por sua potencial aplicabilidade. Nesse projeto buscamos compreender a internalização e o tráfego intracelular de NLS na transfecção de CRISPR/cas9 para o silenciamento do gene TGIF às células tumorais de mama da linhagem MDA-MB-231 (TNBC) cultivadas em formato esferoide (cultura 3D), analisando os efeitos gerados. As avaliações desses mecanismos biológicos poderão proporcionar a compreensão de mecanismos moleculares de internalização de partículas para o carreamento da ferramenta de edição gênica CRISPR/Cas9, além de promover o silenciamento do gene TGIF.