Análise do status de inativação do cromossomo X em blastóides humanos

Resumo

Em mamíferos placentários, a inativação de cópias extras do cromossomo X é essencial para a viabilidade de embriões fêmeas. Apesar de ser bem descrito em camundongos, o processo de inativação do cromossomo X (ICX) em embriões humanos pré-implantação ainda não foi totalmente elucidado. Devido às questões éticas e dificuldades técnicas associadas ao uso de embriões humanos em pesquisas, o desenvolvimento de um modelo baseado em células-tronco do blastocisto para uso no estudo da compensação de dose em embriões é desejável. Enquanto células-tronco pluripotentes (PSCs) primed não são adequadas para essa aplicação, PSCs humanas naive apresentam dois cromossomos X ativos e têm o potencial de gerar células do trofoblasto e hipoblasto extra-embriônicos. Recentemente, hPSCs naive foram utilizadas na geração de blastóides, estruturas tridimensionais similares ao blastocisto humano. Porém, o status de ICX durante conversão e manutenção dessas estruturas não foi avaliado. Assim, nós propomos uma colaboração com o Dr. Jun Wu e seu grupo no Centro Médico Universidade do Texas Southwestern, o primeiro a gerar blastóides humanos. Inicialmente, geraremos e manteremos em cultura hPSCs naive com cariótipos XX e XY. Depois, essas células serão utilizadas na geração de blastóides. Durante o processo, o status de ICX e expressão de genes ligados ao cromossomo X serão avaliados por RNA-FISH, qPCR e/ou single-cell RNA-sequencing. Além de contribuir para a elucidação do processo de ICX em embriões humanos, o projeto contemplará a capacitação da aluna, que poderá estabelecer a tecnologia de blastóides humanos em laboratórios brasileiros. (AU)