Efeitos da combinação de compostos do café e agentes antitumorais sobre o Carcinoma Hepatocelular: investigação in vitro e in vivo

Resumo

O Carcinoma Hepatocelular (CHC) é uma neoplasia de grande incidência e mortalidade mundialmente, possuindo um mau prognóstico. Muitos pacientes acometidos, em geral, em estágios avançados, recorrem às terapias sistêmicas de baixa responsividade. A modulação do microambiente tumoral também é negligenciada nas terapias antitumorais. Uma miríade de epidemiológicos destacam que o consumo de café pode reduzir em até 40% o risco para o CHC. Essa bebida é um reservatório de diversos compostos bioativos (CBs) de diferentes classes que já demonstraram efeitos antiproliferativos, pró-apoptóticos e anti-inflamatórios em estudos pré-clínicos, como a cafeína (CAF), o ácido clorogênico (ACG), o kahweol (KWL). Pela necessidade de aumento de eficácia das terapias atuais, avaliaremos se a administração - isolada ou em combinação - do alcaloide CAF, do diterpeno KWL e do polifenol ACG, abundantes no café, promovem melhora na resposta antitumoral da terapia com Sorafenibe ou imunoterapia com Atezolizumabe+Bevacizumabe em modelos in vitro e in vivo de CHC. Para tanto, estabeleceremos modelos de co-cultivo de células tumorais de CHC (HepG2) e células estreladas (LX2). Os co-cultivos serão tratados com os CBs - isoladamente ou em combinação - e com as respectivas terapias por 24 ou 48 h. Avaliaremos viabilidade (MTT), citotoxicidade (LDH), motilidade (scratch assay) e imunoexpressão de Ki-67 (proliferação), caspase-3 (apoptose) e VEGF (angiogênese). Em seguida, será calculado o Índice Combinatório (IC) e as combinações com resultados aditivos/sinérgicos serão selecionadas para o estudo in vivo. Camundongos BALB/c nude serão submetidos à modelo de tumores xenográficos pela implantação de tumores formados de células HepG2/LX2. Os animais serão tratados com os CBs selecionados e respectivas terapias, e será avaliada imunoexpressão de Ki-67, caspase-3, CD31 e VEGF, e as principais vias tumorigênicas e de microambiente tumoral ao nível transcriptômico (NanoString) nos tumores. Validaremos as principais vias alteradas ao nível proteico (imunoistoquímica e immunoblot) em amostras humanas, utilizando-se da técnica de Patient-derived xenograft (PDX). Para tanto, amostras humanas de CHC serão coletadas, implantadas em camundongos imunossuprimidos, e tratadas com os CBs e terapias selecionadas. (AU)