Efeitos dos aditivos alimentares carboximetilcelulose e polissorbato 80 sobre o processo de hepatocarcinogênese associada à doença hepática gordurosa não-alcoólica

Resumo

Atualmente, o carcinoma hepatocelular (CHC) figura como o 6º/3º mais incidente/mortal tipo de neoplasia maligna no mundo. Associada a 32% dos casos de CHC nos EUA, a doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD) afeta ~25% da população mundial e se relaciona com o consumo de dieta ocidental (DO), rica em alimentos hipercalóricos e ultra-processados (AUP). Dentre os aditivos alimentares mais frequentemente observados em AUP, estão ocarboximetilcelulose (CMC) e o polissorbato 80 (P80), cujo consumo crônico promove o desbalanço do eixo fígado-intestino-adiposo, causando a disbiose intestinal, distúrbios da dinâmica glicose/insulina e da adipogênese, e danos hepáticos. No entanto, não existem estudos que avaliem o efeito desses compostos sobre o desenvolvimento do CHC associado NAFLD. Dessa forma, o projeto busca avaliar os efeitos do CMC e/ou P80 sobre a hepatocarcinogênese associada à NAFLD em modelos in vivo e in vitro. Camundongos C57BL/6 receberão doses intraperitoneais de dietilnitrosamina [DEN, 25mg/Kg de peso corpóreo (p.c.), 1×/semana, por 4 semanas] ou solução salina, a partir do 14º dia pós-natal. A partir da 6ª semana de vida e, por 24 semanas, receberão um protocolo de DO (ração hipercalórica: 30% de gordura saturada/20% de sacarose/0,2% de colesterol; e high-sugar solution: 55/45% de d-frutose/d-glicose) ou dieta basal, além de administrações intragástricas de CMC (370/740 mg/Kg de p.c.) e/ou P80 (100/200 mg/Kg de p.c.) (5×/semana, por 24 semanas). Serão coletadas amostras, destinadas às análises morfológicas e moleculares, de fígado (histopatologia de lesões neoplásicas, acúmulo de lipídio/colágeno, reações de imunoistoquímica para Ki67, caspase-3 clivada e ±-actina de músculo liso, e determinação dos perfis metabolômico e transcriptômico de lesões neoplásicas), tecido adiposo (histopatologia, azul de toluidina e reação de imunoistoquímica para CD68), intestino delgado (histopatologia, reações de imunoistoquímica para zonula occludens-1 e ocludina, e coloração PAS/alcian blue), fezes (determinação do perfil da microbiota intestinal) e soro (teste de tolerância à glicose e dosagem de alanina aminotransferase, colesterol total e triglicérides). Em co-cultura de esferoides de células C3A (células de CHC humano) e LX-2 (células estreladas hepáticas humanas), em meio suplementado com ácidos graxos, serão avaliados a viabilidade celular e o acúmulo de lipídios e deposição de fibras colágenas. Os dados obtidos serão analisados por one-way ANOVA ou Kruskal-Wallis seguido do teste pos hoc de Tukey (p<0,05).