Multimodel Drug Screening Platform (MDSP): insights pré-clínicos e moleculares para o gerenciamento dos cânceres de cólon e fígado

Resumo

O Carcinoma Hepatocelular (CHC) e o Carcinoma Colorretal (CCR) são neoplasias de grande incidência e mortalidade mundialmente, e ambas possuem mau prognóstico. Muitos pacientes acometidos, em geral, em estágios avançados, recorrem às terapias sistêmicas de baixa responsividade. A modulação do microambiente tumoral também é negligenciada nas terapias antineoplásicas. Os estudos epidemiológicos mais proeminentes destacam que o consumo de café e hortaliças pode reduzir o risco para o CHC e CCR, respectivamente. Esses alimentos são reservatórios de diversos compostos bioativos (CBs) que já demonstraram efeitos antiproliferativos, pró-apoptóticos e anti-inflamatórios em estudos pré-clínicos, como a cafeína (CAF), o ácido clorogênico (ACG), o kawheol (KWL), o fenetil isotiocianato (PEITC) e a ²-criptoxantina (BCX). Pela necessidade de aumento de eficácia das terapias atuais, avaliaremos se a administração - isolada ou em combinação - (1) do alcaloide CAF, do diterpeno KWL e do polifenol ACG, abundantes no café, promovem melhora na resposta antitumoral da terapia com Sorafenibe ou imunoterapia com Atezolizumabe+Bevacizumabe em modelos in vivo, in vitro e ex vivo de CHC; (2) do isotiocianato PEITC, do polifenol ACG, e do carotenoide BCX, abundantes em hortaliças, promovem melhora na resposta antitumoral da terapia com 5-fluorouracil+Bevacizumabe em modelos in vivo, in vitro e ex vivo de CCR. Para tanto, estabeleceremos modelos de co-cultivo de células tumorais de CHC (HepG2) e células estreladas (LX2) ou células tumorais de CCR (HCT-116) e fibroblastos (CCD-18Co). Os co-cultivos serão tratados com os CBs - isoladamente ou em combinação - e com as respectivas terapias por 24 ou 48 h. Avaliaremos viabilidade (MTT), citotoxicidade (LDH), motilidade (scratch assay), invasão (transwell assay) e imunoexpressão de Ki-67 (proliferação), caspase-3 (apoptose) e VEGF (angiogênese). Em seguida, será calculado o Índice Combinatório (IC) e as combinações com resultados aditivos/sinérgicos serão selecionadas para o estudo in vivo. Camundongos BALB/c nude serão submetidos à modelo de tumores xenográficos pela implantação de tumores formados de células HepG2/LX2 ou HCT-116/CCD-18Co. Os animais serão tratados com os CBs selecionados e respectivas terapias, e será avaliada imunoexpressão de Ki-67, caspase-3, CD31 e VEGF, e as principais vias tumorigênicas e de microambiente tumoral ao nível transcriptômico (NanoString) nos tumores. Validaremos as principais vias alteradas ao nível proteico (imunoistoquímica e immunoblot) em amostras humanas, utilizando-se das técnicas de Precision Cut Slices e Patient-derived xenografts. Amostras humanas de CCR ou CHC serão coletadas, cultivadas (Brasil) ou implantadas em camundongos imunossuprimidos (Espanha), e tratadas com as terapias selecionadas. O projeto também envolve o estabelecimento de uma empresa para venda, assessoria e execução de testes farmacológicos nos sistemas in vivo, in vitro e ex vivo estabelecidos, além de um projeto de extensão universitária voltado à nutrição/divulgação científica. (AU)