Expressão de prolactina humana glicosilada em células HEK293 e relativa análise da composição dos N-glicanos

• Processo: 19/18999-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2020
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Paolo Bartolini
• Beneficiário: Paolo Bartolini
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: HEK293 cell | Human prolactin | Maldi-Tof-Ms | N-glycans | N-glycoprofiling l | Análise de carboidratos

Resumo

A prolactina (PRL) é um hormônio produzido pela glândula hipófise com inúmeras funções, como por exemplo a lactação, a reprodução, a regulação osmótica e imunológica. O presente trabalho descreve a síntese da hPRL em células embrionárias de rim humano (HEK293), transfectadas de forma transiente com o vetor pcDNA-3.4-TOPO® que carrega o cDNA da hPRL. Uma concentração de 20 mg/L, incluindo prolactina humana glicosilada (G-hPRL) e não glicosilada (NG-hPRL) foi obtida com ~19% de G-hPRL. um valor que é maior daquele observado na hPRL derivada de células CHO (~10%) e incluido no amplo intervalo de 5-30% relatado para a prolactina nativa pituitaria. A análise dos perfis de N-glicosilação da HEK-G-hPRL proporcionou: (i) identificação de cada estrutura de N-glicanos e intensidade relativa; (ii) valor médio da massa dos N-glicanos; (iii)massa molecular da glicoproteina e massa relativa da fração de carboidratos; (iv) fração de massa de cada monossacarideo. Os dados obtidos foram comparados com aqueles obtidos com a G-hPRL natural e com aquela derivada de células CHO. A massa molecular (MM) total da HEK-G-hPRL, determinada mediante MALDI-TOF-MS, foi de 25.123 Da, sendo 0,88 maior daquela natural e 0,61 maior daquela derivada de CHO. A diferença principal com esta última é devida a sialilação, que é ~7 vezes menor, mas levemente maior daquela observada G-hPRL nativa, com a qual possui em comun também o número de estruturas de N-glicanos. (AU)