Imunização subtrativa de múltiplas tolerizações: efeitos nos camundongos e na especificidade de anticorpos monoclonais

• Processo: 22/12600-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2023
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Andrei Moroz
• Beneficiário: Andrei Moroz
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Anticorpos monoclonais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cyclophosphamide | Monoclonal antibody | multiple tolerization subtractive immunization | Anticorpos monoclonais

Resumo

Anticorpos monoclonais (mAbs) têm sido uma ferramenta valiosa para elucidar diversos processos biológicos, como diferenciação de células-tronco e câncer, e contribuíram para praticamente todas as áreas das ciências biomédicas. No entanto, continua a ser um desafio obter mAbs específicos para epítopos mal expressos, ou para epítopos que estão realmente envolvidos em fenômenos biológicos importantes, como diferenciação celular e metástase. A imunização subtrativa induzida por drogas e, recentemente, a técnica de imunização subtrativa de tolerância múltipla (MTSI), relatada por nosso grupo, têm o potencial de nivelar o campo, pois direcionam a resposta imune do hospedeiro para esses epítopos. No entanto, devido ao tratamento com ciclofosfamida (CY), alta mortalidade de camundongos pode ser observada, e apenas alguns dados estão disponíveis sobre como essas técnicas afetam o sistema imunológico de camundongos. Células de tolerógeno e imunógeno, células RWPE-1 e PC-3, respectivamente, foram semeadas individualmente a 2 × 104 células/cm2 e, em seguida, ajustadas para 2 × 106 células por camundongo antes da imunização, que foi conduzida em uma abordagem subtrativa (MTSI) com CY. A imunossupressão de camundongos foi registrada por meio de contagem total de leucócitos, bem como a reatividade de anticorpos policlonais circulantes (pAbs). Parâmetros gerais, incluindo peso, aparência física e comportamento em camundongos submetidos a três diferentes concentrações de CY foram registrados. Os mAbs foram obtidos usando técnicas clássicas de hibridoma, usando o baço de camundongos imunizados. Após a purificação, os anticorpos foram caracterizados por Western blotting e imunofluorescência indireta. Em conclusão, todas as dosagens de CY foram eficientes em criar um estado de imunossupressão, mas apenas a dosagem de 100 mg/kg de peso corporal foi viável, pois as demais resultaram em extensa mortalidade de camundongos. Os pAbs obtidos no sangue periférico de camundongos apresentaram maior reatividade às células tumorais. Os MAbs 2-7A50 e 2-5C11 reconheceram antígenos de células tumorais, mas não de suas contrapartes não tumorais, como mostrado em ensaios de Western blotting e imunofluorescência. A técnica MTSI foi bem sucedida na geração de mAbs que reconhecem antígenos específicos de tumor. (AU)