Análise comparativa das atividades enzimática, coagulante e neuromuscular de duas variantes do veneno de Crotalus durissus ruruima e eficácia de antiveneno

• Processo: 24/22210-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2025
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Toxicologia
• Pesquisador responsável: Rafael Stuani Floriano
• Beneficiário: Rafael Stuani Floriano
• Instituição Sede: Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação. Universidade do Oeste Paulista (UNOESTE). Presidente Prudente , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Coagulant activity | Crotalus durissus venom | enzymatic activity | Intraspecific variation | Neurotoxicity | Neutralization by antivenom | Venenos e toxinas animais

Resumo

Neste trabalho, nós comparamos as atividades enzimática, coagulante e neuromuscular de duas variantes (amarela - CDRy e branca - CDRw) do veneno de Crotalus durissus ruruima com uma amostra do veneno de C. d. terrificus (CDT) e examinamos sua neutralização pelo antiveneno terapêutico expressado contra o veneno de CDT. SDS-PAGE mostrou que os venenos exibiram perfis semelhantes aos de C. durissus ssp. na eletroforese, com as bandas principais correspondendo a fosfolipase A2 (PLA2) (crotoxina), serino proteinase, L-aminoácido oxidase (LAAO) e fosfodiesterase. Veneno de CDRy teve maior atividade proteolítica e LAAO, enquanto o veneno de CDRw teve maior atividade PLA2 e esterolítica com a maior quantidade testada (10 ug). Venenos de CDRw e CDT tiveram semelhante atividade proteolítica e LAAO, enquanto os venenos de CDRy e CDT tiveram comparável atividade esterolítica, e CDT teve maior atividade PLA2 do que CDRy. Nenhum dos venenos alteraram o tempo protrombina (TP), mas todos eles marcadamente diminuíram o tempo tromboplastina parcial atividade (TTPa) e esta atividade foi neutralizada pelo antiveneno (razões antiveneno:veneno de 1:1.5 e 3:1.5, v/w). A potência de dose mínima coagulante foi CDRw >> CDRy > CDT. Todos os veneno tiveram atividade trombina-símile (potência: CDRw > CDRy > CDT) que foi eficientemente atenuada pelo antiveneno (1:1.5, v/w). Venenos de CDRy e CDRw foram fibrinogenolíticos, clivando completamente a cadeia-alfa durante uma incubação de 90 min, enquanto CDT foi inativo contra esta cadeia de fibrinogênio. Todos os venenos clivaram parcialmente a cadeia-beta em ~41% (CDRy), ~54% (CDRw) e ~36% (CDT) após 90 min. Venenos de CDRy e CDT (3-100 ug/ml) causaram facilitação neuromuscular (contrações musculares aumentadas) em preparação nervo frênico-diafragma de camundongo seguido por completo bloqueio das respostas contráteis dentro de 2 h, enquanto o veneno de CDRw (3-100 ug/mL) causou apenas bloqueio neuromuscular. Antiveneno (razões antiveneno:veneno de 1:1.5 e 3:1.5, v/w) neutralizou a atividade neuromuscular dos três venenos (10 ug/ml) em graus variados, com CDRw mostrando maior reatividade-cruzada com antiveneno. Estes achados indicam que enquanto os venenos de CDR and CDT compartilham similaridades, eles também diferem em importantes aspectos, incluindo os níveis de algumas atividades enzimáticas e biológicas, e na extensão de neutralização pelo antiveneno. Algumas destas diferenças poderiam influenciar as manifestações clínicas, tais como coagulopatia e neurotoxicidade, do envenenamento por C. d. ruruima. A variação vista na neutralização de algumas atividades poderiam também ter importantes implicações no uso do antiveneno atualmente disponível para tratar picadas por estas serpentes. (AU)