Caracterizacao de hl-a, uma proteina especie-especifica de mycobacterium tuberculosis.

• Processo: 96/06506-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 1997
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 1998
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Sylvia Luisa Pincherle Cardoso Leão
• Beneficiário: Sylvia Luisa Pincherle Cardoso Leão
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Mycobacterium tuberculosis Clonagem Macrófagos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem De Genes | Fosfolipase C | Macrofagos | Mycobacterium Tuberculosis

Resumo

Um fragmento de DNA de 3.0 kb DNA, espécie-específica de M. tuberculosas foi identificado a partir de uma biblioteca genômica e seqüenciado (Barra et al., 1991; Leão et al., 1995). A análise da seqüência deste fragmento revelou a existência de duas fases abertas de leitura (ORFs): HL-A e HL-B, com alto grau de similaridade (75%) entre si. Uma pesquisa comparativa em bancos de dados (programas FASTA, TFASTA e BLAST) revelou também uma similaridade importante entre estas duas ORFs e duas fosfolipases C (PLC-N e PLC-H, codificadas pelos genes plc-N e plc-S, respectivamente) de Pseadamonas aeruginosa. A ORF HL-A foi amplificada por PCR e clonada no vetor de expressão pGEX-5T. Extratos celulares de S. coli expressando esta proteína recombinante produzem hemólise ß, sugestiva de atividade de fofolipase. Fosfolipases C são reportadas como fatores de virulência de P. aeruginosa e outros patógenos. É portanto possível supor que estas proteínas possam também participar de mecanismos patogênicos da tuberculose. O presente projeto de pesquisa pretende prosseguir na caracterização de HL-A, verificando a expressão da proteína nativa em M.tuberculosis e o seu efeito na capacidade microbicida do macrófago. (AU)