Avaliação, padronização e desenvolvimento de marcadores moleculares visando o diagnóstico espécie-específico da Leishmaniose tegumentar americana

• Processo: 10/16963-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Paulo Cesar Cotrim
• Beneficiário: Paulo Cesar Cotrim
• Instituição Sede: Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMT). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: José Angelo Lauletta Lindoso
• Assunto(s): Leishmaniose Reação em cadeia por polimerase (PCR) Técnicas de diagnóstico molecular Amplificação do DNA Polimorfismo de fragmento de restrição
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diagnóstico Molecular | Hsp70 | leishmania | Leishmaniose Cutânea | Pcr | Pentamidina | Biologia Molecular de Leishmania

Resumo

O objetivo principal dessa proposta é analisar a sensibilidade e especificidade da utilização de cinco diferentes iniciadores para a reação em Cadeia da Polimerase (PCR) visando consolidar um método diagnóstico robusto para a identificação da espécie envolvida na Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no Brasil. Pretende-se comparar os dados coletados nos resultados obtidos com metodologias clássicas de diagnóstico da LTA (Exame Direto, Cultura, Sorologia, Reação de Montenegro), além dos dados clínicos de cada paciente. Pretendemos ainda validar esse teste prospectivo analisando diferentes espécies referência do parasita, amostras de outros tripanosomatídeos, além de amostras de pacientes com processos patológicos relacionados. Para tanto, quatro alvos moleculares foram selecionados para a padronização das amplificações: 1) região conservada do minicírculo do kDNA, 2) região dos espaçadores internos transcritos do rDNA (ITS1rDNA), 3) região que codifica a enzima Glicose-6-Fosfato Desidrogenase (G6PD), e 4) região do gene que codifica a proteína de choque térmico HSP70. Também será avaliado um quinto e prospectivo alvo contendo uma região do gene que codifica uma glico-proteína-P de membrana, PRP-1. A PRP-1 foi identificada e descrita pelo nosso grupo de pesquisa e está relacionada com a resistência do parasita à Pentamidina. O desenvolvimento deste projeto de pesquisa é consequência natural de um projeto multicêntrico coordenado pela FIOCRUZ (em fase final de validação), onde as metodologias de coleta de material clínico, de extração e de amplificação do DNA, bem como ensaios com enzimas de restrição (RFLP) para a identificação das espécies de Leishmania foram padronizados e validados por laboratórios de referência no Brasil, e que contou com a participação de nosso grupo de pesquisa. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SATOW, MARCELA M.; YAMASHIRO-KANASHIRO, EDITE H.; ROCHA, MUSSYA C.; OYAFUSO, LUIZA K.; SOLER, RITA C.; COTRIM, PAULO C.; LINDOSO, JOSE ANGELO L.. APPLICABILITY OF kDNA-PCR FOR ROUTINE DIAGNOSIS OF AMERICAN TEGUMENTARY LEISHMANIASIS IN A TERTIARY REFERENCE HOSPITAL. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, v. 55, n. 6, p. 393-399, NOV-DEC 2013. (10/16963-4)