| Processo: | 10/18094-3 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Data de Início da vigência: | 01 de junho de 2011 |
| Data de Término da vigência: | 31 de maio de 2013 |
| Área do conhecimento: | Ciências da Saúde - Odontologia - Clínica Odontológica |
| Pesquisador responsável: | Victor Elias Arana-Chavez |
| Beneficiário: | Victor Elias Arana-Chavez |
| Instituição Sede: | Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | São Paulo |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 11/12748-4 - Efeito do fator de transformação de crescimento - beta 1 (TGF-²1) e da dexametasona na biomineralização: estudo in vitro, BP.TT |
| Assunto(s): | Biologia oral Fator de crescimento transformador beta1 Calcificação fisiológica Osteoblastos Dexametasona Cultura de células |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | cultura de células | Dexametasona | Mineralização | osteoblastos | TGF- b1 | vias de sinalização | Biologia Oral |
Resumo
O sistema de cultura de células tem sido usado rotineiramente em estudos detalhados da formação óssea em ambientes controlados, em que é possível analisar minuciosamente eventos celulares e da MEC. Além das linhagens osteoblásticas, outro sistema in vitro comumente usado é a cultura de células osteogênicas primárias - derivadas de calvárias de rato. Em estudo anterior realizado no nosso laboratório foram testados a dexametasona -Dex (10-7 M) e o TGF-²1 (5 ng/mL), separadamente e simultaneamente, em células osteogênicas derivadas de calvárias de rato e, em todos os tratamentos, houve a expressão das proteínas OPN, BSP e FN. As células tratadas apenas com a Dex formaram nódulos de mineral, mas esses, na maioria das vezes, estavam entre poucas fibrilas de colágeno e/ou depositados sobre o substrato, sugerindo que teria ocorrido uma nucleação espontânea desse mineral. Já quando tratadas com o TGF-²1, foram observadas alterações na morfologia das células, bem como a ausência de componentes da MEC. Por outro lado, quando tratadas com as duas moléculas simultaneamente, a morfologia apresentou-se igual à encontrada nas células tratadas apenas com o TGF-b1; porém, foram observados alguns focos de fibrilas de colágeno. O presente projeto propõe investigar os efeitos moleculares do TGF-b1 e da Dex, bloqueando seus receptores e estudando alguns elementos das respectivas vias de sinalização, bem como a atuação dessas na habilidade de diferenciação das células osteogênicas em diferentes estágios correspondentes à biomineralização, efetuando estudos bioquímicos - atividade de fosfatase alcalina, marcação de nódulos de mineral pelo método de histoquímica; a expressão de proteínas não colágenas como: OPN, BSP, OC e ON, envolvidas nesse processo, através de imunofluorescência com microscopia de confocal, e também a quantificação por Western-blot e RT-PCR. (AU)
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