Efeito do fator de transformação de crescimento -beta 1 (TGF-²1) e da dexametasona na biomineralização: estudo in vitro nas vias de sinalização

Resumo

O sistema de cultura de células tem sido usado rotineiramente em estudos detalhados da formação óssea em ambientes controlados, em que é possível analisar minuciosamente eventos celulares e da MEC. Além das linhagens osteoblásticas, outro sistema in vitro comumente usado é a cultura de células osteogênicas primárias - derivadas de calvárias de rato. Em estudo anterior realizado no nosso laboratório foram testados a dexametasona -Dex (10-7 M) e o TGF-²1 (5 ng/mL), separadamente e simultaneamente, em células osteogênicas derivadas de calvárias de rato e, em todos os tratamentos, houve a expressão das proteínas OPN, BSP e FN. As células tratadas apenas com a Dex formaram nódulos de mineral, mas esses, na maioria das vezes, estavam entre poucas fibrilas de colágeno e/ou depositados sobre o substrato, sugerindo que teria ocorrido uma nucleação espontânea desse mineral. Já quando tratadas com o TGF-²1, foram observadas alterações na morfologia das células, bem como a ausência de componentes da MEC. Por outro lado, quando tratadas com as duas moléculas simultaneamente, a morfologia apresentou-se igual à encontrada nas células tratadas apenas com o TGF-b1; porém, foram observados alguns focos de fibrilas de colágeno. O presente projeto propõe investigar os efeitos moleculares do TGF-b1 e da Dex, bloqueando seus receptores e estudando alguns elementos das respectivas vias de sinalização, bem como a atuação dessas na habilidade de diferenciação das células osteogênicas em diferentes estágios correspondentes à biomineralização, efetuando estudos bioquímicos - atividade de fosfatase alcalina, marcação de nódulos de mineral pelo método de histoquímica; a expressão de proteínas não colágenas como: OPN, BSP, OC e ON, envolvidas nesse processo, através de imunofluorescência com microscopia de confocal, e também a quantificação por Western-blot e RT-PCR. (AU)