Estudo das regiões do promotor do P450c17 humano que contem seqüências de reconhecimento do NF1 e do SF1: análise dos determinantes da atividade funcional e as implicações na especificidade da expressão do P450c17 no córtex supra-renal

• Processo: 00/11362-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2006
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Chin Jia Lin
• Beneficiário: Chin Jia Lin
• Instituição Sede: Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 01/12571-5 - Caracterizacao e identificacao dos fatores ligantes a regiao -70/-33 do promotor do citocromo p450c17 humano e avaliacao do papel do sf-1 na transcricao do cyp17 mediada por camp., BP.PD
• Assunto(s): Transcrição genética Mutagênese Esteroide 17-alfa-hidroxilase Genes da neurofibromatose 1 Enzimas Córtex suprarrenal Fatores de transcrição GATA Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citocromo P450 | Interacao Dna-Proteina | Mutagenese | Transcricao Genica
• Publicação FAPESP: https://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_97_107_108.pdf

Resumo

A enzima citocromal P450c17 é a chave reguladora qualitativa da cadeia da esteroidogênese e apresenta uma especificidade da expressão tissular peculiar dentre as enzimas esteroidogênicas. O presente projeto visa à identificação dos determinantes da especificidade da expressão do gene do P450c17 (CYP17) no córtex da adrenal humana e se concentrará na análise da interação dos fatores da família dos NF1 e 2 de suas sequencias de reconhecimento presentes nas bases -107/-85 (FP1) e -178/-152 (FP2) da região promotora do gene do CYP17 humano, bem como na caracterização do(s) fator(es) nuclear(es) presente nas células NCI-H295A que se liga(m) às sequência -70/-33, que contém uma suposta sequência de reconhecimento do SF-1 e de fatores da família GATA. As abordagens experimentais serão a clonagem dos fatores NF1 expressos na adrenal humana por PCR e pelo sistema de um-híbrido de leveduras (yeast one-hybrid system), estudo da expressão das isoformas do NF-1 nas camadas do córtex adrenal, identificação das famílias de NF1 que se ligam especificamente aos sítios FP1 e FP2 e análise do efeito da orientação e da posição desses sítios na transição CYP17 humano. Os fatores que se ligam à sequência -70/-33 do CYP17 humano serão caracterizados usando as técnicas clássicas de análise da interação DNA-proteína (footprint com radical hidroxila e ensaios de interferência). (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ANGELA SILVA BARBOSA; CHIN JIA LIN. Silenciamento de genes com RNA interferência: um novo instrumento para investigação da fisiologia e fisiopatologia do córtex adrenal. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e Metabologia, v. 48, n. 5, p. 612-619, 2004-10-00. (00/11362-0, 01/12571-5)