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Estudo das regiões do promotor do P450c17 humano que contem seqüências de reconhecimento do NF1 e do SF1: análise dos determinantes da atividade funcional e as implicações na especificidade da expressão do P450c17 no córtex supra-renal

Resumo

A enzima citocromal P450c17 é a chave reguladora qualitativa da cadeia da esteroidogênese e apresenta uma especificidade da expressão tissular peculiar dentre as enzimas esteroidogênicas. O presente projeto visa à identificação dos determinantes da especificidade da expressão do gene do P450c17 (CYP17) no córtex da adrenal humana e se concentrará na análise da interação dos fatores da família dos NF1 e 2 de suas sequencias de reconhecimento presentes nas bases -107/-85 (FP1) e -178/-152 (FP2) da região promotora do gene do CYP17 humano, bem como na caracterização do(s) fator(es) nuclear(es) presente nas células NCI-H295A que se liga(m) às sequência -70/-33, que contém uma suposta sequência de reconhecimento do SF-1 e de fatores da família GATA. As abordagens experimentais serão a clonagem dos fatores NF1 expressos na adrenal humana por PCR e pelo sistema de um-híbrido de leveduras (yeast one-hybrid system), estudo da expressão das isoformas do NF-1 nas camadas do córtex adrenal, identificação das famílias de NF1 que se ligam especificamente aos sítios FP1 e FP2 e análise do efeito da orientação e da posição desses sítios na transição CYP17 humano. Os fatores que se ligam à sequência -70/-33 do CYP17 humano serão caracterizados usando as técnicas clássicas de análise da interação DNA-proteína (footprint com radical hidroxila e ensaios de interferência). (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ANGELA SILVA BARBOSA; CHIN JIA LIN. Silenciamento de genes com RNA interferência: um novo instrumento para investigação da fisiologia e fisiopatologia do córtex adrenal. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e Metabologia, v. 48, n. 5, p. 612-619, . (00/11362-0, 01/12571-5)