Inhibitory Peptides of the Sulfotransferase Domain of the Heparan Sulfate Enzyme, N-Deacetylase-N-sulfotransferase-1

• Processo: 10/20335-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Maria Aparecida da Silva Pinhal
• Beneficiário: Maria Aparecida da Silva Pinhal
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina do ABC (FMABC). Organização Social de Saúde. Fundação do ABC. Santo André , SP, Brasil
• Assunto(s): Heparitina sulfato
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biossíntese de glicosaminoglicanos | heparam sulfato | peptídeos inibitórios | sulfotransferase | Bioquímica e Biologia Molecular

Resumo

N-desacetilase-N-sulfotransferase 1 (Ndst1) catalisa a reação inicial de modificação do heparam sulfato durante a biossíntese por remoçnao dos grupos acetil dos resíduos de N-acetilglucosamina e subsequente sulfatação, resultando em amino grupos livres. No presente estudo, nós utilizamos uma biblioteca de fagos para selecionar peptídeos que interagem com Ndst1, com o objetivo de encontrar inibidores de tal enzima. A biblioteca de fagos consiste de peptídeos de 10 aminoácidos aleatórios e cíclicos, expressos no capsídeos do fago na proteína pIII. A seleção foi baseada na capacidade do fago ligar-se à proteína recombinante Ndst1 (mNdst1) e ser deslocado pela heparina. Os peptídeos foram enriquecidos por múltiplos ciclos de ensaios de ligação e deslocamento, selecionando duas sequências específicas, CRGWRGEKIGNC e CNMQALSMPVTC. Ambos peptídeos inibiram a atividade de mNdst1 in vitro por diferentes mecanismos. O peptídeos CRGWRGEKIGNC apresenta uma sequência citocina-like (BXX, onde B representa um aminoácido básico e X um aminoácido não carregado) e se liga ao heparam sulfato, bloqueando a ligação do substrato à enzima. O peptídeos NMQALSMPVT inibe a atividade de mNdst1 por interação direta com a enzima próxima ao sítio ativo. A descoberta de tais peptídeos inibitórios por tal metodologia sugere o desenvolvimento de peptídeos inibitórios para a biossíntese de heparam sulfato. (AU)