Analise da acao da cloroquina sob a replicacao do virus dengue-2 em celulas de linhagem monociticas e em macacos aotus.

• Processo: 06/55789-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Benedito Antônio Lopes da Fonseca
• Beneficiário: Kleber Juvenal Silva Farias
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Viremia Citocinas Células U937 Reação em cadeia da polimerase em tempo real
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas U937 | Citocinas Inflamatorias | Macacos Aotus | Pcr Em Tempo Real | Viremia | Virus Dengue-2

Resumo

Os vírus dengue pertencem a família Flaviviridae, possuem um genoma RNA de polaridade positiva, fita simples, de cerca de 11 kb, que codifica uma única poliproteína, incluindo três proteínas estruturais e sete não-estruturais. Este projeto tem como objetivo estudar o efeito da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 (New Guinea C) em cultura de células de linhagem monocítica (U937) e em macacos do gênero Aotus. A avaliação da inibição da replicação viral pela cloroquina (aumenta o pH endossomal) será realizada em células U937 tratadas, concomitantemente e após a infecção viral a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,1 pfu por célula. Sobrenadantes das células infectadas serão coletados após períodos de 0, 6,12, 24, 48, 72, 96,120,144 e 168 horas da infecção viral. Será realizada a extração do RNA total do sobrenadante através do Kit QIAamp® RNA Viral (QIAGEN®, USA) e a detecção do número de cópias de RNA será analisada por PCR em tempo real. Para verificar a ação das drogas in vivo no sentido de investigar o seu possível uso em humanos, grupos de macacos Aotus serão desafiados com uma injeção subcutânea de uma cepa virulenta do vírus dengue-2, e tratados ou não 2 dias após a infecção com a cloroquina por via oral, sendo que a droga será administrada em intervalos de 24 horas durante sete dias. Os animais serão observados durante 30 dias. Serão investigados parâmetros clínicos que estes animais possam apresentar tais como, febre ou alteração do comportamento. A viremia e as dosagens de citosinas inflamatórias (IL-1beta, TGF, TNF-alfa e IFN-gama) serão analisados por PCR em tempo real, e a análise do monitoramento dos níveis séricos das aminotransferases (ALT e AST) será feita por métodos convencionais. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SILVA FARIAS, KLEBER JUVENAL; LIMA MACHADO, PAULA RENATA; DE ALMEIDA JUNIOR, RENATO FERREIRA; DE AQUINO, ANA ALICE; LOPES DA FONSECA, BENEDITO ANTONIO. Chloroquine interferes with dengue-2 virus replication in U937 cells. MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, v. 58, n. 6, p. 318-326, JUN 2014. (05/04450-4, 06/55789-4)

SILVA FARIAS, KLEBER JUVENAL; LIMA MACHADO, PAULA RENATA; PEREIRA CARNEIRO MUNIZ, JOSE AUGUSTO; IMBELONI, ALINE AMARAL; LOPES DA FONSECA, BENEDITO ANTONIO. Antiviral Activity of Chloroquine Against Dengue Virus Type 2 Replication in Aotus Monkeys. VIRAL IMMUNOLOGY, v. 28, n. 3, p. 161-169, APR 1 2015. (05/04450-4, 06/55789-4)