Analise da acao da cloroquina sob a replicacao do virus dengue-2 em celulas de linhagem monociticas e em macacos aotus.

Resumo

Os vírus dengue pertencem a família Flaviviridae, possuem um genoma RNA de polaridade positiva, fita simples, de cerca de 11 kb, que codifica uma única poliproteína, incluindo três proteínas estruturais e sete não-estruturais. Este projeto tem como objetivo estudar o efeito da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 (New Guinea C) em cultura de células de linhagem monocítica (U937) e em macacos do gênero Aotus. A avaliação da inibição da replicação viral pela cloroquina (aumenta o pH endossomal) será realizada em células U937 tratadas, concomitantemente e após a infecção viral a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,1 pfu por célula. Sobrenadantes das células infectadas serão coletados após períodos de 0, 6,12, 24, 48, 72, 96,120,144 e 168 horas da infecção viral. Será realizada a extração do RNA total do sobrenadante através do Kit QIAamp® RNA Viral (QIAGEN®, USA) e a detecção do número de cópias de RNA será analisada por PCR em tempo real. Para verificar a ação das drogas in vivo no sentido de investigar o seu possível uso em humanos, grupos de macacos Aotus serão desafiados com uma injeção subcutânea de uma cepa virulenta do vírus dengue-2, e tratados ou não 2 dias após a infecção com a cloroquina por via oral, sendo que a droga será administrada em intervalos de 24 horas durante sete dias. Os animais serão observados durante 30 dias. Serão investigados parâmetros clínicos que estes animais possam apresentar tais como, febre ou alteração do comportamento. A viremia e as dosagens de citosinas inflamatórias (IL-1beta, TGF, TNF-alfa e IFN-gama) serão analisados por PCR em tempo real, e a análise do monitoramento dos níveis séricos das aminotransferases (ALT e AST) será feita por métodos convencionais. (AU)