Clonagem e expressão da proteína imunossupressora do veneno da serpente Lachesis muta

• Processo: 07/50558-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunoquímica
• Pesquisador responsável: Denise Vilarinho Tambourgi
• Beneficiário: Giselle Pidde Marques Porto
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/14307-9 - Center for Applied Toxinology, AP.CEPID
• Assunto(s): Biblioteca gênica Imunossupressão
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biblioteca De Cdna | Imunossupressao | Lechesis Muta | Toxinas Recombinantes | Transcriptoma | Veneno

Resumo

Estudos sobre a baixa produção de anticorpos neutralizantes contra o veneno de serpentes do gênero Lachesis permitiram a identificação de um fator imunossupressor presente no veneno da espécie L. muta, designado LMVp. Com o propósito de contribuir para o melhor entendimento do mecanismo supressor desta proteína sobre a resposta imune humoral e, consequentemente, para avaliar uma possível aplicação da atividade imunossupressora em pesquisas científicas e/ou tratamentos clínicos, este trabalho tem como objetivos a clonagem e caracterização da LMVp. A LMVp foi purificada da fração com atividade imunossupressora do veneno de L. muta e submetida à análise por espectrometria de massas. Fragmentos da proteína foram seqüenciados e, a partir dessas seqüências de aminoácidos, foram desenhados "primers" degenerados para a obtenção do cDNA codificante para a LMVp, utilizando a técnica de RT-PCR. Foram selecionados dois clones, nomeados Lr23 e Lr100, com similaridade significativa com a seqüência primária da LMVp nativa. Com a intenção de caracterizar as proteínas codificadas pelos clones isolados, as seqüências deduzidas de aminoácidos foram submetidas a análise por Bioinformática, sendo que suas seqüências primárias e secundárias foram estudadas e comparadas, obtendo-se modelos estruturais para ambos os clones. Os cDNAs foram subclonados no vetor pRSET-A para expressão em E. coli e, no momento, estão sendo estabelecidas as condições para purificação das proteínas recombinantes para sua caracterização. (AU)