Comparação de métodos de quantificação em microscopia de luz da quantidade de gordura em lesões ateroscleróticas de artérias coronárias humanas

• Processo: 10/19292-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2013
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
• Pesquisador responsável: Paulo Sampaio Gutierrez
• Beneficiário: Thiago Vaz de Lima Grilo Pereira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Histoquímica Vasos coronários Aterosclerose Lipídeos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: artérias coronárias | aterosclerose | Histoquímica | Lipídeos | Patologia cardiovascular

Resumo

As doenças cardiovasculares constituem-se na causa principal de morbidade e mortalidade mundiais, sendo um grave problema para a saúde pública, a despeito dos grandes avanços na sua prevenção e no seu tratamento feitos nos últimos anos. Estima-se que mais de 70% dessas mortes estão relacionadas com a aterosclerose. Devido à sua importância na identificação da placa vulnerável de ateroma (aquelas placas com maiores riscos de causarem eventos cardiovasculares futuros), faz-se necessária uma correta quantificação da gordura no seu interior. São numerosos os trabalhos feitos em material com processamento histológico habitual, que, no entanto, é responsável por extrair as gorduras. Desse modo, a quantificação de gordura na placa deve ser estimada, não estando definido ainda quanto da estimativa feita corresponde a gordura de fato. Há, porém, um outro tipo de processamento (não tão utilizado quanto o primeiro), no qual o material passa por um processo de congelação em criostato antes de ser emblocado em parafina. Assim, ocorre a conservação das gorduras, as quais devem ser coradas posteriormente pelo Sudan IV, permitindo a possibilidade de quantificá-las de forma mais precisa. Adicionalmente, um método relativamente novo, desenvolvido por Tracy e Walia, ainda pouco utilizado, deve ser testado. Dessa forma, o objetivo principal do trabalho é a comparação entre os três métodos, sendo considerado como padrão-ouro o método de congelação, com corante Sudan IV. Em caso de discrepâncias significativas entre a quantificação de gordura de cada método, irá se tentar buscar uma relação matemática de correção. Secundariamente, busca-se verificar se há relação entre a porcentagem de gordura e a área da placa, ou porcentagem de obstrução. O estudo será prospectivo, utilizando trinta corações de pacientes que vierem a morrer com doença isquêmica do coração e forem submetidos a necrópsia no Laboratório de Anatomia Patológica do Instituto do Coração do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Após fixação em formol a 10%, as artérias coronárias serão dissecadas em bloco e submetidas a tratamento com solução descalcificante. A seguir, segmentos de um centímetro de comprimento de cada um dos três vasos coronários principais serão selecionados para o presente estudo. Cada um dos segmentos selecionados será subdividido em dois. Uma metade será submetida a embebição conforme o método descrito por Tracy e Walia, emblocada em parafina e corada pelo Sudan IV, para gorduras. A outra metade será congelada em criostato e também corada pelo Sudan IV. Após feitos os cortes em congelação, os segmentos serão recolocados em formol, submetidos a processamento histológico habitual e emblocados em parafina. Cortes serão corados por hematoxilina e eosina. As secções serão observadas em microscópio de luz acoplado a sistema computadorizado de análise de imagens, sendo feitas manualmente (com uso do "mouse") as medidas da área da luz e da área delimitada pela lâmina elástica interna; pela subtração do valor da primeira do desta última, será obtida a área da íntima. Será também calculada a porcentagem de obstrução causada pela. Usando o sistema automático de detecção por cor será quantificada a área ocupada por gordura na túnica íntima. Será então calculada a porcentagem de área intimal ocupada por gordura. As medidas feitas nos cortes de congelação serão tomadas como padrão-ouro, e as demais comparadas a elas. Para tal será utilizado o teste ANOVA para medidas repetidas. Adicionalmente, será analisada, pelo teste de Pearson, a correlação entre as porcentagens de gordura e de obstrução coronária. Serão considerados significativos os resultados em que a probabilidade de erro a (p) seja igual ou inferior a 0,05 e os níveis de correlação tenham coeficiente (r2) igual ou superior a 0,75.