Caracterização molecular e funcional de proteínas que compõem o complexo spliceosomal em tripanosomatídeos

• Processo: 08/07761-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Regina Maria Barretto Cicarelli
• Beneficiário: Elisete Marcia Do Prado Pereira de Godoy
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 07/07476-0 - Caracterização molecular e funcional de proteínas que compõem o complexo spliceosomal em tripanosomatídeos, AP.R
• Assunto(s): Trans-splicing Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: trans-splicing | Biologia Molecular

Resumo

Em tripanosomatideos, o processo de trans-splicing e responsável pelo processamento dos pré-mRNAs policistronicos, resultando na individualização de cada gene, de modo que cada mRNA contenha a seqüência spliced leader (SL) na extremidade 5. Esse processo requer a participação das ribonucleoproteínas (snRNPs) U2, U4/U6, U5 e SL RNP, que são constituídas por snRNAs, 7 proteínas Sm (comuns a todos) e proteínas especificas de cada partícula. Através da produção in vivo e purificação da proteína SmD1-PTP tagged, foi possível a identificação de 41 proteínas que interagem com essa partícula, das quais 16 foram anotadas como proteínas conservadas hipotéticas. Dentre essas, já foi possível a identificação de um homólogo de proteína especifica U1-A, uma proteína Lsm, uma proteína U5 especifica e duas proteínas que não se ligam diretamente a esses snRNAs, mas que provavelmente participam do mecanismo como fatores de splicing. Sendo assim, este projeto propõe a caracterização molecular e funcional das outras 11 proteínas conservadas hipotéticas com o intuito de identificar novos possíveis pontos de ataque quimioterápico parasita-específico. Para isso serão utilizadas técnicas de PTP-tag, primer extension para a análise de ligação aos snRNAs, RNAi para a verificação da essencialidade para a sobrevivência do parasita e funcionalidade na reação de trans-splicing. Os dados obtidos serão importantes em futuros experimentos de avaliação de mecanismo de ação de substâncias tripanocidas na reação de trans-splicing em tripanosomas. (AU)