Construção de sistemas de expressão para proteínas humanas visando estudar sua regulação pela fosfatase PP2A através da proteína TIPRL

• Processo: 08/10924-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nilson Ivo Tonin Zanchin
• Beneficiário: Karoline Mendonça
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/02083-7 - Caracterizacao funcional de proteinas envolvidas no controle da expressao genica., AP.R
• Assunto(s): Expressão de proteínas Interação proteína-proteína Monoester fosfórico hidrolases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: fosfatase PP2A | Interação proteína-proteína | vetores de expressão | controle da expressão gênica

Resumo

Através do sistema duplo-híbrido de levedura identificamos a interação da proteína TIPRL com a subunidade catalítica da fosfatase PP2A e também com os fatores de transcrição MafB e TAF10. A interação da TIPRL com os fatores de transcrição MafB e TAF10 indica que a TIPRL pode estar envolvida em processos celulares de regulação da expressão gênica. Além disso, a purificação de fosfoproteínas de em células HEK293 que superexpressam a TIPRL levou à identificação de duas novas proteínas candidatas a interagir com a TIPRL, sendo elas SF2/ASF, produto do gene SFRS1 (Splicing factor, arginine/serine-rich 1), e p32, produto do gene C1QBP (complement component 1, q subcomponent binding protein). Os estudos dos mecanismos de regulação da função de proteínas por interação com outras proteínas ou modificações por fosforilação/desfosforilação requerem que se demonstre as interações tanto com proteínas recombinantes como em cultura de tecidos através co-imunoprecipitação e co-localização. Tendo em vista que não existem anti-corpos para a maioria destas proteínas, na maioria dos casos é necessário clonar as proteínas fusionadas com "tags" em vetores de expressão tanto para sistemas bacterianos como para transfecção de células de mamíferos mantidas em cultura e posterior co-imunoprecipitação. A nossa meta ao final do treinamento é de que o bolsista tenha autonomia com os métodos que são fundamentais em laboratórios avançados de Biologia Molecular, sendo que este aprendizado lhe será muito útil para a carreira de profissional de nível técnico. (AU)