Efeito do pré-condicionamento isquêmico na taxa de mortalidade em ratos após períodos variados de isquemia intestinal

• Processo: 11/07540-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2011
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Cirurgia
• Pesquisador responsável: Belchor Fontes
• Beneficiário: John Kioshi Shimazaki
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Isquemia e reperfusão Isquemia mesentérica Mortalidade Modelos animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Isquemia intestinal | mortalidade | gastroentérica

Resumo

A isquemia intestinal ocorre em processos patológicos diversos, resultantes desde a oclusão da artéria mesentérica superior (OAMS) até de estados de hipofluxo, como o choque hemorrágico. A isquemia / reperfusão (I/R) intestinal pode levar à lesão da mucosa intestinal e desencadear a liberação de mediadores inflamatórios diversos, resultando numa resposta inflamatória sistêmica (SIRS) que acarreta lesão de múltiplos órgãos, sobretudo a lesão pulmonar aguda (LPA), e culminar na disfunção e falência de múltiplos órgãos e sistemas (FMOS). Em 1986, Murry et al. introduziram o conceito do pré-condicionamento isquêmico (PCI) como um meio de minimizar as lesões da isquemia seguida de reperfusão, e descreveram para isto o efeito benéfico de curtos períodos de oclusão da artéria coronária seguidos por curtos períodos de reperfusão, aplicados imediatamente antes do início da fase isquêmica propriamente dita, e observaram redução significativa da lesão isquêmica miocárdica em cães. Os estudos do mecanismo do PCI em modelos de I/R intestinal ou de choque relatam que o efeito protetor do PCI envolve a produção de diversos mediadores inflamatórios, bem como da HO-1 que tem efeito protetor na I/R e na lesão por oxidação. Embora alguns autores tenham mencionado o efeito do PCI sobre a mortalidade de ratos submetidos a I/R intestinal, os resultados apresentados na literatura consultada não são conclusivos, visto que as taxas de mortalidade decorrente dos diferentes períodos de isquemia nos diversos modelos de I/R intestinal não estão definitivamente estabelecidas. Além disso, o efeito do pré-condicionamento isquêmico sobre a mortalidade dos animais nestes experimentos ainda não foi claramente determinado. Objetivo. O objetivo do presente projeto de pesquisa é determinar as taxas de mortalidade resultantes de diversos períodos de isquemia intestinal seguida de reperfusão em ratos, bem como avaliar o efeito do pré-condicionamento isquêmico sobre as taxas de mortalidade observadas para os períodos de I/R intestinal estudados. Método. O presente estudo será realizado no Laboratório de Fisiopatologia Cirúrgica (LIM-62) da Divisão de Clínica Cirúrgica III (DCC III) do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP). Serão utilizados ratos Wistar, machos, livres de doenças, pesando entre 230 e 350 gramas, provenientes do Biotério Central da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (USP). Os animais serão divididos em sete grupos: 1) controle basal (CTR; 2) laparotomia (LAP); 3) I/R-45; 4) I/R-60; 5) I/R-75; 6) I/R-90; 7) I/R-120. Para os grupos 2 a 7 será realizado o pré-condicionamento isquêmico com um período de isquemia por OAMS por 10 minutos seguido por 10 minutos de reperfusão, imediatamente antes da correspondente isquemia mais prolongada. Para avaliação da mortalidade, após a realização dos procedimentos acima descritos para os diferentes grupos, os animais serão observados por 7 dias. A quantificação da lesão pulmonar aguda será feita por meio do teste de extravasamento do corante Azul de Evans (Evans blue dye - EBD), que quantifica a permeabilidade vascular pulmonar. Além da mortalidade e da LPA, serão avaliados neste estudo os mediadores da SIRS, bem como marcadores séricos ou teciduais caracterizando a presença do PCI. Os mediadores da SIRS serão determinados por meio do método ELISA. A indução da Heme-oxigenase (HO) será realizada através da extração do RNA total da parede intestinal do animal de acordo com o método descrito.