Estágio de curta duração no exterior sobre o vírus da Coriomeningite linfocitária

• Processo: 13/16550-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: João Gustavo Pessini Amarante Mendes
• Beneficiário: Narciso Junior Vieira
• Supervisor: Pamela S. Ohashi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Toronto (U of T), Canadá
• Vinculado à bolsa: 11/20352-3 - Papel da rab2a, rab5a, rab17 e rab18 na função efetora de células citotóxicas, BP.DD
• Assunto(s): Imunidade Resposta imune Linfócitos T CD8-positivos Vírus da coriomeningite linfocítica Células matadoras naturais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: células citotóxicas | células natural killer | Linfócitos T CD8 | Resposta imune a vírus | Vírus da Coriomeningite Linfocitária | Imunidade a Vírus

Resumo

A esta altura do meu projeto de doutorado, nós já caracterizamos a presença de membros da família RAB em grânulos citotóxicos por técnicas de microscopia confocal e eletrônica. O próximo passo é realizar ensaios funcionais utilizando células citotóxicas selvagens e deficientes nessas proteínas. Para obter as células deficientes em RABs nós utilizaremos modernas técnicas de biologia celular e molecular, como RNAi, para construir vetores shRNA e desenvolver linhagens celulares de células natural killer (NK) e/ou linfócitos T citotóxicos (CTL) estáveis. A seguir, tentaremos identificar a importância das proteínas do nosso estudo no killing citotóxico. Para isso, realizaremos ensaios de citotoxicidade in vitro e, se possível, in vivo, em que compararemos a atividade de células transfectadas com vetor e shRNA. Para completar essas tarefas, nós contaremos com o apoio da Professora Pamela Ohashi e de seu grupo de pesquisa. A Professora Ohashi concordou em me receber no Ontário Cancer Institute, localizado em Ontário-Canadá, onde poderei aprender um modelo bem estabelecido de infecção com o vírus da coriomeningite linfocitária (LCMV) e técnicas relacionadas, e com isso, avançar algumas etapas do meu projeto de doutorado. O LCMV, um patógeno natural de roedores, é uma excelente ferramenta amplamente utilizada em estudos de respostas imunes antivirais, particularmente aquelas mediadas por CTLs. Os epítopos dominantes e subdominantes desse patógeno já foram caracterizados e a frequência de CTL epítopo-específica pode ser facilmente avaliada com a utilização da tecnologia de multímeros de MHC, que são complexos oligoméricos de moléculas de MHC portando o peptídeo antigênico específico desejado. Baseado nessas e em outras características, esse modelo de infecção estabelece uma incrível plataforma para realização de estudos das células citotóxicas. Entre os ganhos acadêmicos que este estágio de curta duração irá proporcionar, podemos destacar o aprendizado de uma nova metodologia experimental que permitirá a avaliação do comportamento de células citotóxicas in vitro e in vivo utilizando o LCMV. Além disso, essa metodologia será posteriormente implantada no nosso laboratório, expandindo assim o potencial das pesquisas realizadas pelo nosso grupo. Uma parte do treinamento inclui o manejo adequado do vírus, garantindo com isso a segurança no momento da manipulação e condições ideais de cultivo, além do crescimento e titulação do microrganismo. De fundamental importância será também o treinamento que receberei para realizar ensaios de citotoxicidade in vitro e marcações de citometria de fluxo para avaliar a frequência de populações específicas utilizando a tecnologia do tetrâmero. Finalmente, eu terei a oportunidade de participar dos encontros científicos realizados pelo grupo da Professora Ohashi e dos seminários do Instituto, bem como poderei discutir diretamente com a Professora Ohashi diferentes aspectos do meu projeto de pesquisa. Essa colaboração poderá, portanto, fornecer expertise e ferramentas específicas que influenciarão diretamente o desenvolvimento do meu projeto de pesquisa. Além disso, a experiência de trabalhar em um grande grupo de pesquisa internacional permitirá um grande crescimento pessoal e intelectual. (AU)