Função luteal no diestro cíclico e gestacional canino: uma abordagem celular do ponto de vista gênico e metabólico

• Processo: 13/15358-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2013
• Data de Término da vigência: 26 de novembro de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Maria Denise Lopes
• Beneficiário: Ana Augusta Pagnano Derussi
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 15/23450-7 - Avaliação do mecanismo de luteólise em corpo lúteo cíclico e gestacional canino, BE.EP.PD
• Assunto(s): Ciclo estral animal Diestro Fase luteal Corpo lúteo Cães
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: canino | corpo lúteo | Diestro | função luteal | Biotecnologia da Reprodução Animal

Resumo

A similaridade entre a fase luteal cíclica e gestacional na espécie canina é um dos fatores mais intrigantes dentro da fisiologia reprodutiva desta espécie e apesar dos diversos estudos e avanços realizados em relação ao tema, ainda são bastante inconclusivos. Com o intuito de investigar as variações existentes entre o perfil gênico do corpo lúteo (CL) gestacional e cíclico, avaliaremos os principais fatores mitogênicos, angiogênicos, imunológico, apoptóticos e receptores hormonais existentes nessas fases e analisaremos as vias metabólicas e a produção hormonal das células luteínicas em cultivo. Realizaremos o acompanhamento do ciclo estral e ovariohisterectomia de fêmeas em diestro cíclico (n=16) e gestacional (n=16). Os corpos lúteos (CLs) serão coletados entre os dias 7-11, 21- 25, 40-44 e 61-64 após a onda pré-ovulatória de LH em todas as fêmeas. Para análise do perfil gênico, os CLs do ovário direito serão submetidos à técnica de RNAseq e posteriormente serão selecionados 3 genes principais entre os fatores de escolha e receptores hormonais diferencialmente expressos, que serão validados através da técnica qRT-PCR e imuno-histoquímica. Os CLs do ovário esquerdo serão submetidos à técnica de cultivo celular e o meio será coletado a cada06, 12 e 24 horas, para análises da produção metabólica (ATP,ADP, glicose, lactato) e hormonal (progesterona e estrógeno) através de kits comerciais. As análises do RNAseq serão realizadas por meio da plataforma Galaxy e os programas CASAVA v.1.8.2,TopHat v.2.0.1, Bowtie v. 0.12.8 para mapeamento e analise de expressão diferencial. Na validação da expressão gênica será avaliado a normalidade e variâncias, podendo ser utilizado ANOVA ou Kruskal Wallis. Os dados serão analisados através do programa GraphPad Prism 5. Para metabolismo celular e perfil hormonal será realizado ANOVA. Será considerado o nível de significância quando p<0,05. (AU)