| Processo: | 13/25181-8 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de março de 2014 |
| Data de Término da vigência: | 31 de dezembro de 2017 |
| Área de conhecimento: | Ciências da Saúde - Odontologia |
| Pesquisador responsável: | Juliana Campos Junqueira |
| Beneficiário: | Rodnei Dennis Rossoni |
| Instituição Sede: | Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 14/12458-4 - Ação probiótica de Lactobacillus spp. na infecção por Candida albicans: estudo em modelos hospedeiros de invertebrados, BE.EP.DR |
| Assunto(s): | Caenorhabditis elegans Candida albicans Galleria mellonella Lactobacillus Saliva Probióticos |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Caenorhabditis elegans | Cândida Albicans | Expressão de genes | Galleria mellonella | Lactobacillus | probiótico | Microbiologia Bucal |
Resumo O objetivo desse estudo será isolar e identificar cepas de Lactobacillus spp. da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e avaliar sua ação probiótica sob Candida albicans por meio de estudos in vitro e in vivo. Amostras de saliva serão semeadas em ágar MRS e as colônias isoladas serão identificadas pelo sistema API50CHL e confirmadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Primeiramente, serão avaliados os efeitos de todas as cepas identificadas como Lactobacillus sobre a formação de biofilme e capacidade de filamentação de C. albicans in vitro. Serão avaliados os efeitos diretos das células de Lactobacillus sobre C. albicans e também os efeitos indiretos, utilizando apenas o sobrenadante da cultura. Os biofilmes mistos serão formados em fundo de placas de 96 poços por 48 horas e quantificados pela contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Os ensaios de filamentação de C. albicans serão realizados em placas de cultura de células de 24 poços e analisados por microscopia óptica. A seguir, serão selecionadas 10 cepas que apresentarem melhor ação inibitória sobre C. albicans para a realização dos demais ensaios. Para estudo in vivo, as cepas de Lactobacillus serão inoculadas juntamente com C. albicans em modelos hospedeiros de infecção experimental (Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans). No modelo de G. mellonella, a infecção experimental será avaliada pela curva de sobrevivência, quantificação da carga fúngica na hemolinfa, densidade hemocitária e quantificação da melanização dos animais estudados. No modelo de C. elegans, a infecção será avaliada por meio dos ensaios de curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL no trato intestinal dos nemátodos e estudo da filamentação de C. albicans. Além disso, será realizada a quantificação da expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1 de C. albicans em biofilmes monotípicos e heterotípicos com Lactobacillus formados in vitro por 48 horas, utilizando o ensaio de PCR em Tempo Real (qPCR). Os resultados serão submetidos a uma análise exploratória para a seleção do teste estatístico mais adequado para cada experimento desse estudo. O nível de significância considerado de cada teste será de 5%. (AU) | |
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