Interação entre a Nucleoproteína do Vírus Sincicial Respiratório Humano e a proteína celular MAGEA11

• Processo: 15/10241-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Armando Morais Ventura
• Beneficiário: Stephanie Santos Suehiro Arcos
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Virologia Vírus sincicial respiratório humano Replicação viral Ribonucleoproteínas RNA interferente pequeno Imunofluorescência
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: co-imunoprecipitação | interação entre proteínas | Magea11 | Nucleoproteína | replicação viral | Vírus Sincicial Respiratório Humano | Virologia

Resumo

O Vírus Sincicial Respiratório Humano (HRSV) pertence à família Paramyxoviridae e tem genoma de RNA simples fita sentido negativo, com aproximadamente 15.000 nucleotídeos que codificam 11 proteínas. O HRSV é um dos principais causadores de doenças respiratórias em crianças e recém-nascidos no mundo, além de afetar também idosos e pessoas com imunodeficiência. Ainda não existem medicamentos e nem vacinas eficazes contra o HRSV. Assim, a busca de alvos terapêuticos contra o HRSV é uma prioridade, havendo o potencial de caracterizá-los estudando a interação vírus-célula. Nesse sentido, foi realizado um experimento com o sistema duplo-híbrido em levedura, onde uma das proteínas utilizadas como isca foi a nucleoproteína viral (N), contra duas bibliotecas humanas. Observou-se forte indicativo de interação entre N e a proteína celular MAGEA11, que age como co-reguladora de receptores de andrógeno através da sua ligação ao motif FXXLF. Como encontramos esse motif na sequência de aminoácidos de N, é possível que MAGEA11 seja recrutada por ela ao aparato de transcrição-replicação associado com o genoma viral. Para testar esta hipótese, propomos neste projeto verificar se ocorre a interação entre N e MAGEA11 em células de mamífero através das técnicas de co-imunoprecipitação e de co-localização por imunofluorescência. Em caso positivo, faremos um teste de complementação utilizando o sistema Split Gaussia luciferase para demonstrar a proximidade entre N e MAGEA11 ao nível molecular, e verificaremos se a inibição da expressão de MAGEA11 por siRNA afeta a replicação do HRSV em culturas celulares.