Estudo do efeito da ativação celular por padrões moleculares associados a patógenos ou a perigo na viabilidade e diferenciação de células de papila apical in vitro

• Processo: 15/12218-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
• Pesquisador responsável: Carla Renata Sipert
• Beneficiário: Pamela Rocha Lopes de Almeida
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Odontogênese Imunidade inata Diferenciação celular Canal radicular Sobrevivência celular Citotoxicidade Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) Análise de variância Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: diferenciação celular | imunidade inata | papila apical | Biologia Celular

Resumo

O desenvolvimento dentário é rotineiramente interrompido por processos inflamatórios resultantes de trauma dental ou infecção do canal radicular. O papel da papila apical no desenvolvimento radicular tem sido demonstrado pela literatura; entretanto, os mecanismos envolvidos na modulação deste tecido por subprodutos bacterianos ou células necróticas resultantes de cárie ou trauma são ainda desconhecidos. Sendo assim, o objetivo deste projeto é investigar a citotoxicidade e diferenciação odontogênica de células de papila apical humana sob desafio com subprodutos bacterianos como lipopolissacarídeo (LPS) e/ou ácido lipoteicóico (LTA) ou sobrenadante de células necróticas (SN) isolamente ou combinados. Culturas primárias de células de papila apical (n = 3) serão estabelecidas por meio de uma técnica de explante. Células serão plaqueadas para a avalição da citotoxicidade de concentrações crescentes de LPS, LTA, SN, LPS + LTA, LPS + LTA + SN por 1, 3 e 5 dias. Meio somente será empregado como controle. A expressão constitutiva e a modulação de receptores de reconhecimento de PAMPs e DAMPs serão investigados por meio de RT-qPCR. As maiores concentrações incapazes de comprometer a viabilidade celular serão usadas para ativar as células previamente ao ensaio de diferenciação. Células serão mantidas em contato com os estímulos ou com meio somente por 5 dias e serão submetidas à diferenciação odontogênica por 14 e 28 dias. Como controle negativo, células naïve serão mantidas em meio de proliferação convencional. A diferenciação celular será analisada por meio de deposição de cálcio empregando-se coloração por vermelho de alizarina S. Os dados serão analisados por meio de análise de variância a um critério ajustando-se p < 0,05.