Obtenção de linhagens mutantes de Leishmania amazonensis capazes de expressar luciferases modificadas

• Processo: 15/26121-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2016
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Silvia Reni Bortolin Uliana
• Beneficiário: Victor de Sousa Agostino
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Protozoologia Leishmania mexicana Leishmaniose visceral Quimioterápicos Tratamento Triagem Luciferases In vivo Técnicas in vitro Modelo experimental
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: gene reporter | Leishmanioses | luciferase | quimioterapia | Tratamento | Leishmanioses

Resumo

Protozoários do gênero Leishmania são os agentes etiológicos de leishmaniose visceral e tegumentar, doenças com apresentações clínicas bastante diversas. Anualmente cerca de 2 milhões de novos casos de leishmaniose tegumentar e visceral são diagnosticados no mundo. Poucos são os fármacos disponíveis para tratamento de leishmanioses no Brasil: antimoniato de meglumina, anfotericina B e pentamidina. Esses medicamentos apresentam diversos problemas como alta toxicidade, administração por via parenteral e alto custo. Existe, dessa forma, grande urgência em se buscar novas alternativas para a terapia dessas doenças. Em nosso laboratório, temos buscado identificar novos quimioterápicos para aplicação no tratamento de leishmanioses. Para isso, temos empregado modelos experimentais para teste de compostos candidatos utilizando parasitas mutantes expressores de genes repórter. Dessa forma a detecção dos parasitas é facilitada, tanto in vitro como in vivo. Mutantes expressores de luciferase foram obtidos e utilizados com sucesso na caracterização da atividade de fármacos. Entretanto, algumas limitações foram encontradas no uso da luciferase como repórter. Esse projeto tem como objetivo a obtenção de linhagens de Leishmania amazonensis mutantes expressoras de variantes da enzima luciferase denominadas NanoLuc, NanoLuc-PEST e RedLuc. Essas enzimas são capazes de catalisar reações que produzem luz com maior atividade específica ou em comprimentos de onda diferentes da luciferase tradicional, de forma que deverão possibilitar um grande aumento de sensibilidade na detecção de parasitas nos testes in vitro e in vivo de triagem de fármacos. Essas linhagens transgênicas poderão ser também utilizadas em estudos sobre a fisiopatologia da doença.