Estabelecimento de linhagem celular com silenciamento permanente da PKCbI por shRNA e seu impacto fenotípico

• Processo: 15/20227-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Daniela Sanchez Basseres
• Beneficiário: Estela Maura Mesquita Carabette
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias mamárias Replicação do DNA Evolução fenotípica Linhagem celular Inativação gênica Proteínas quinases Cromatina Expressão gênica Proliferação celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer de mama | Mcf-7 | PKCb1 | shRNA | silenciamento | Bioquímica

Resumo

As proteínas quinases são de grande importância para o organismo, por isso são amplamente conservadas em diversos organismos. Entre essas se encontram a proteína quinases C (PKC) que fosforilam o grupo hidroxila de serinas e treoninas. Essa família de quinases são divididas em 10 isoformas que se diferenciam de acordo com os seus mecanismos de ativação. As PKCs normalmente se encontram no citoplasma celular quando inativas e translocam para membranas plasmáticas e de organelas quando ativadas. Entretanto, nos últimos anos, demonstrou- se que também podem translocar para o núcleo celular, tendo participação em diversos processos como: regulação da replicação do DNA, síntese de RNA, composição de estruturas de cromatina, e controle da expressão genica. Nosso grupo observou que em células de câncer de mama MCF-7, positivas para receptores de estrogênio, ocorre a expressão das PKCs bI e bII no núcleo celular. Porém o papel dessas isoenzimas no núcleo dessas células e no câncer de mama, ainda não é bem compreendido, dessa forma, no presente projeto desejamos realizar o silenciamento da PKCbI em células MCF-7. Para isso utilizaremos partículas lentivirais de short hairpin RNA (shRNA), assim estabeleceremos uma linhagem de células MCF-7 sem a expressão do gene para a PKCbI e observar os efeitos da proliferação e formação de colônias da deleção especifica dessa isoforma no núcleo das células MCF-7.