Estudo do papel da proteína NEDD4L na regulação da diferenciação de linfócitos Treg induzidos por TGF-²

• Processo: 17/04200-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2017
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: José Carlos Farias Alves Filho
• Beneficiário: Letícia Magalhães Arruda
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/08216-2 - CPDI - Centro de Pesquisa em Doenças Inflamatórias, AP.CEPID
• Assunto(s): Metabolismo celular Inflamação Linfócitos T reguladores O-GlcNAcilação Fatores transformadores de crescimento
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: diferenciação de linfócitos T reguladores | GlcNacilação | imunoregulação | Nedd4L | Tgf | Metabolismo Celular e Inflamação

Resumo

Os linfócitos T reguladores (Tregs) são células essenciais na homeostase do sistema imune. Diferentemente dos linfócitos T helpers (Ths), que estão envolvidos na resposta efetora da imunidade adaptativa, as Tregs atuam na supressão das atividades potencialmente deletérias dos linfócitos Ths, por intermédio de diversas atividades supressoras. O principal estímulo de diferenciação de Tregs na periferia é a citocina TGF-²1,2. O TGF-² liga-se a um receptor de membrana e desencadeia uma resposta intracelular que culmina na fosforilação e, consequente, ativação das proteínas Smad2 e Smad3. As proteínas Smads são Fatores de Transcrição (FT) importados para o núcleo que, atuando em sinergia com outros FTs, promovem a diferenciação de linfócitos T "naives" em Tregs por promover a expressão do Foxp3, que é o principal FT destas células3. Além da via de Smads, TGF-² também ativa diversas outras vias, que variam dependendo do tipo celular2. A amplitude e a duração do estímulo de TGF-² são limitados pela ubiquitinação de Smad2 e Smad3 pela ubiquitina ligase NEDD4L, que marca seletivamente essas proteínas para destruição, alterando seu tempo de meia vida e de turn over4,5. Em nosso laboratório, foi demonstrado que a ativação de linfócitos por TGF-² ativa a via metabólica das hexosaminas, com a consequente produção do açúcar modificado UDP-GlcNAc, o qual é utilizado como substrato para a O-GlcNAcilação de proteínas pela enzima OGT (uridina-difosfo-N-acetilglicosamina:polipeptideo-²-N-acetilglicosaminiltransferase ou O-GlcNActransferase) (manuscrito em preparação). A enzima OGT modifica pós-traducionalmente o esqueleto de proteínas-alvo citoplasmáticas e nucleares, pela adição de UDP-GlcNAc em resíduos de serina e treonina. Dessa forma, a GlcNAcilação modifica e, portanto, regula funções de proteínas de maneira análoga ou competindo com o processo de fosforilação. Nesse contexto, nós identificamos que o TGF-² promove a O-GlcNAcilação de NEDD4L nas Tregs durante sua diferenciação e que o bloqueio da O-GlcNAcilação através da inibição da OGT reduz a diferenciação destas células. Assim, considerando a relevância de NEDD4L na regulação negativa da sinalização do TGF-², nossa hipótese é de que a O-GlcNAcilação da NEDD4L induzida por TGF-² seja um processo crítico para a diferenciação e estabilidade das Tregs. Desta forma, o presente projeto propõe investigar a função da NEDD4L, bem como avaliar a importância da O-GlcNAcilação desta proteína, na diferenciação das Tregs. (AU)