Análises funcionais de variantes de significado clínico desconhecido do gene de predisposição ao câncer de mama PALB2

• Processo: 17/17451-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2017
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Edenir Inêz Palmero
• Beneficiário: Ariane Stéfani Pereira
• Instituição Sede: Hospital do Câncer de Barretos. Fundação Pio XII (FP). Barretos , SP, Brasil
• Assunto(s): Oncologia Neoplasias mamárias Genes supressores de tumor Dano ao DNA Bioensaio Análise funcional Linhagem celular tumoral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Breast Cancer | functional analysis | Hereditary breast cancer | Palb2 | Predisposition genes for breast cancer | Variants of uncertain significance | Oncologia

Resumo

O Câncer de mama é o tipo de câncer mais frequente nas mulheres, sendo cerca de 5-10% hereditários. Os principais genes associados a um alto risco de desenvolvimento do câncer de mama são BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN, CDH1, STK11 e, recentemente adicionado ao grupo, o gene PALB2, um supressor tumoral envolvido em diversas funções celulares, principalmente, no reparo a danos ao DNA. As variantes encontradas nesses genes podem ser classificadas como patogênicas, provavelmente patogênicas, de significado clínico desconhecido (VUS), provavelmente benignas ou benignas. Pacientes cujo teste genético identifica uma VUS tem seu manejo clínico dificultado, dado que o resultado não é esclarecedor para o indivíduo ou família portadora da variante. Um estudo prévio realizado pelo nosso grupo identificou, no gene PALB2, variantes genéticas classificadas como VUS assim como variantes missense não reportadas em bancos de dado e classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas por predições in silico. O presente trabalho pretende, através de ensaios funcionais com duas linhagens celulares de câncer de mama (T47D e HS578T), determinar o papel dessas variantes no gene PALB2. Para tanto, será realizado o silenciamento do gene PALB2 através do sistema CRISPR/Cas9. Em seguida, as variantes c.2816T>G e c.2981T>G, escolhidas para o estudo, e c.1042C>T (controle positivo) serão introduzidas no gene através da técnica de mutagênese sítio-dirigida. Posteriormente, serão realizadas as análises funcionais através dos ensaios de proliferação celular (BrdU), viabilidade celular (MTS), apoptose (citometria de fluxo), proficiência do sistema de reparo por recombinação homóloga, localização celular e co-imunoprecipitação. Esperamos que os ensaios funcionais realizados auxiliem na definição do impacto biológico e clínico dessas alterações no gene PALB2. (AU)