Efeito da associação de BMP-2 e Wnt-3a sobre a expressão temporal de Rad GTPase em células osteoblásticas

• Processo: 17/26791-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2018
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial
• Pesquisador responsável: Márcio Mateus Beloti
• Beneficiário: Bruna Scaf
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Implantodontia Osteoblastos Expressão de proteínas Diferenciação celular Regeneração óssea
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bmp | Osso | osteoblasto | Rad GTPase | Wnt | Implantodontia

Resumo

Rad GTPase (do Inglês, Ras-related associated with diabetes) é uma proteína originalmente identificada na musculatura cardíaca de pacientes portadores de Diabetes Melittus tipo II e que tem sido investigada por sua expressão em diversos tecidos e envolvimento em diferentes processos biológicos. A deficiência de Rad resulta em diminuição significativa da massa óssea caracterizada pela diminuição da atividade osteoblástica e aumento da osteoclastogênese. Ainda, alterações na expressão de Rad se refletem no comprometimento de células-tronco mesenquimais com a diferenciação osteoblástica ou adipocítica. No entanto, até o momento, há pouca informação na literatura acerca da expressão e função de Rad no processo de diferenciação osteoblástica e sua relação com moléculas que sabidamente favorecem a osteogênese. Baseado nessas informações e considerando a participação das vias de BMP e Wnt no processo de osteogênese, o objetivo do presente projeto é avaliar o efeito da associação de BMP-2 e Wnt-3a sobre a expressão temporal de Rad em células osteoblásticas. Para tanto, células da linhagem MC3T3-E1, subclone 14, serão cultivadas sobre o poliestireno na ausência (controle) ou presença das proteínas recombinantes BMP-2 (100 ng/mL) e/ou Wnt-3a (10 ng/mL) por até 14 dias. Aos 3, 5, 7, 10 e 14 dias, será analisada a expressão dos genes marcadores ósseos, fosfatase alcalina, sialoproteína óssea, RUNX2, osterix, osteocalcina e osteopontina e dos genes Rad e MGP (do Inglês, matrix GLA protein), por PCR em tempo real. Aos 10 dias, a atividade in situ de ALP será também avaliada qualitativamente pelo método Fast red. Os dados numéricos serão submetidos ao teste de aderência à curva de distribuição normal para a definição da análise estatística a ser empregada, paramétrica ou não-paramétrica. Os resultados desse estudo poderão gerar dados importantes acerca da função de Rad no tecido ósseo e, possivelmente, contribuir para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para a regeneração óssea. (AU)