Ferramenta de CRISPR/Cas9 para deletar genes das vias de morte celular em células neuronais e o impacto sob infecção de Zika vírus

• Processo: 19/09795-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Ricardo Weinlich
• Beneficiário: Rafaela da Rosa Ribeiro
• Supervisor: Vania Broccoli
• Instituição Sede: Instituto Israelita de Ensino e Pesquisa Albert Einstein (IIEPAE). Sociedade Beneficente Israelita Brasileira Albert Einstein (SBIBAE). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Istituto di Ricovero e Cura a Carattere Scientifico S. de Bellis (IRCCS), Itália
• Vinculado à bolsa: 17/03603-9 - Papel das vias de morte celular na infecção por ZIKA vírus., BP.PD
• Assunto(s): Biologia molecular Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Vírus Zika Morte celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cas | cell death | Crispr | Neurological cells | Zika vírus | Biologia Molecular

Resumo

Diversas vias podem desencadear diferentes tipos de morte celular, sendo apoptose, piroptose e necroptose as mais estudadas. Os dois primeiros tipos envolvem a ativação de caspases, enquanto a necroptose é independente de caspase e depende da ativação de um complexo que contém RIPK3 e MLKL. Durante a infecção viral, a célula hospedeira provoca sua própria morte tentando prejudicar o nicho de replicação do vírus. Não obstante, a co-evolução de hospedeiros e vírus deu aos vírus maneiras de bloquear os caminhos da morte celular. Por exemplo, herpesvírus e poxvírus podem bloquear a apoptose e o citomegalovírus pode bloquear a apoptose e a necroptose. Em 2015, o vírus ZIKA foi trazido à atenção mundial devido à sua associação com distúrbios do sistema nervoso, especialmente com microcefalia. Tem sido relatado que o vírus ZIKA ativa a caspase-3, uma proteína central na via da apoptose em células neuroprogenitoras humanas (NPC), mas ainda não está bem caracterizada como esta caspase é ativada. Além disso, pouco se sabe sobre a indução de outras vias de morte celular pela infecção pelo ZIKA, especialmente em relação à sua importância para o fenótipo da doença. Neste projeto, pretendemos avaliar como as diferentes vias de morte celular impactam no fenótipo de NPC infectadas pelo vírus ZIKA. Atingiremos esse objetivo nocauteando as células-tronco neurais, por CRISPR / Cas9, genes chave nas diferentes vias de morte celular, como FADD (central na via apoptótica extrínseca), caspase-9 (ativador da via apoptótica intrínseca), caspase-1/11 (executores de piroptose), RIPK3 e MLKL (executores de necroptose) e avaliando sua susceptibilidade diferencial à infecção pelo ZIKA. (AU)