Inserção de gene repórter fluorescente em região gênica de Sox2 para estudo da diferenciação celular no desenvolvimento embrionário inicial bovino

• Processo: 19/03014-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Marcelo Demarchi Goissis
• Beneficiário: Felipe Eduardo Luedke
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/09576-3 - Estudos sobre mecanismos de diferenciação celular durante o desenvolvimento embrionário inicial em bovinos, AP.JP
• Assunto(s): Embriologia animal Biotecnologia da reprodução Diferenciação celular Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Blastocisto Proteína 9 associada à CRISPR
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Blastocisto | Cas9 | Crispr | diferenciação celular | massa interna celular | trofectoderma | Embriologia e Biotecnologia da Reprodução

Resumo

A separação entre massa interna celular (MCI) e trofectoderma (TE) é o primeiro evento de diferenciação celular que ocorre no embrião mamífero. Nestes eventos iniciais, ocorre uma expressão coordenada de diversos genes. Falhas nestes processos de desenvolvimento inicial podem ocasionar perdas embrionárias e consequentemente econômicas. Os estudos sobre a diferenciação celular em bovinos ainda são escassos, refletindo em baixos índices de sucesso na produção de embriões bovinos in vitro. As técnicas para estudo dos embriões normalmente envolvem a destruição dos mesmos e não permitem acompanhar em tempo real a dinâmica dos genes relacionados à diferenciação em MCI e TE. Novas técnicas como CRISPR/Cas9 permitem alteração direcionada da sequência de DNA genômico. A introdução direcionada de proteínas fluorescentes repórteres permitiria a visualização em tempo real da expressão de genes de interesse nos embriões. Pretende-se realizar edição gênica nas regiões dos genes Sox2 para a introdução de proteínas fluorescentes por recombinação homóloga. Pretende-se ainda, comparar a eficiência da edição gênica em diferentes momentos do desenvolvimento embrionário. Os experimentos envolverão técnicas de clonagem molecular, microinjeção de embriões e microscopia de fluorescência. Espera-se com este projeto desenvolver uma ferramenta para introdução direcionada de genes repórteres em embriões bovinos e ao mesmo tempo, compreender os mecanismos de diferenciação celular, contribuindo para a melhoria dos protocolos de produção in vitro de embriões. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

LUEDKE, FELIPE EDUARDO; DA COSTA, CAROLINE PEREIRA; MENDES, CAMILLA MOTA; DOS SANTOS HAMILTON, THAIS ROSE; MILAZZOTTO, MARCELLA PECORA; ASSUMPCAO, MAYRA E. O. A.; GOISSIS, MARCELO DEMARCHI. Effects of fetal bovine serum on trophectoderm and primitive endoderm cell allocation of in vitro-produced bovine embryos. ZYGOTE, v. 31, n. 1, p. 7-pg., 2022-10-24. (18/18924-8, 17/09576-3, 19/03014-9, 17/25574-0)

CARREIRO, LETICIA ESCOBAR; DOS SANTOS, GABRIEL SIQUEIRA; LUEDKE, FELIPE EDUARDO; GOISSIS, MARCELO DEMARCHI. ell differentiation events in pre-implantation mouse and bovine embryo. ANIMAL REPRODUCTION, v. 18, n. 4, 2021. (19/22649-5, 19/21303-8, 19/03014-9, 17/09576-3)

LETÍCIA ESCOBAR CARREIRO; GABRIEL SIQUEIRA DOS SANTOS; FELIPE EDUARDO LUEDKE; MARCELO DEMARCHI GOISSIS. Cell differentiation events in pre-implantation mouse and bovine embryos. Animal Reproduction, v. 18, n. 4, 2022-01-07. (19/21303-8, 19/03014-9, 19/22649-5, 17/09576-3)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

LUEDKE, Felipe Eduardo. Inserção de gene repórter fluorescente em região gênica de SOX2 para estudo da diferenciação celular no desenvolvimento embrionário inicial bovino. 2021. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ/SBD) São Paulo.