Caracterização biofísica e estrutural do complexo GR/COUP-TFII

• Processo: 19/13928-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Ana Carolina Migliorini Figueira
• Beneficiário: Izabella Luisa Tambones
• Supervisor: Albane Coirier Le Maire
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Centre de Biochimie Structurale de Montpellier (CBS), França
• Vinculado à bolsa: 18/02481-0 - Regulação do promotor SMyHC III pelos receptores nucleares AR, GR e Coup-TFII: um trabalho solo ou conjunto?, BP.MS
• Assunto(s): Receptores de glucocorticoides Receptores citoplasmáticos e nucleares Fatores de transcrição Transcrição genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Glucocorticoid receptor | heterodimerization | Nuclear Receptors | Biofísica Estrutural

Resumo

Os receptores nucleares (NRs) compreendem a uma superfamília de fatores de transcrição regulados por ligantes. Esses receptores agem sobre a transcrição de genes específicos que podem estar envolvidos em diversos processos biológicos como a proliferação celular, homeostase, metabolismo e outros. Os receptores GR (receptor de glicocorticoides) e COUP-TFII (Chicken ovalbumin upstream promoter-transcription factor) têm sido associados a diversos contextos biológicos, especialmente com o desenvolvimento cardíaco. Apesar desses receptores normalmente exercerem suas funções na forma de homodímeros, a interação entre o GR e o COUP-TFII foi previamente demonstrada por ensaios de pull-down. Nossos resultados (vinculados ao projeto de mestrado principal), obtidos por termoforese em microescala e ensaios tipo pull-down, reforçam e quantificam a interação entre esses receptores, os quais apresentam alta afinidade entre si. Buscando melhor compreender os modos de interação entre esses receptores e construir modelos estruturais acerca desse heterodímero incomum, o presente projeto objetiva a caracterização da interação proteína-proteína envolvendo os receptores GR e COUP-TFII. Para isso, as proteínas de interesse serão expressas utilizando o sistema celular bacteriano de Escherichia coli (BL21 DE3) e serão purificadas por cromatografia de afinidade, gel-filtração e/ou troca iônica. O complexo GR/COUP-TFII será formado a partir dos receptores previamente purificados, e então será submetido a uma etapa de purificação e manutenção da estequiometria por gel-filtração. Uma caracterização biofísica completa do complexo será conduzida no "Centre de Biochimi Structurale in Montepellier (France)" (CBS), assim como os ensaios por Small-Angle X-ray Scattering Assays serão realizados em parceria com essa equipe, utilizando os síncrotron europeus: DESY (Hamburg, Alemanha) e SOLEIL (Paris, França). (AU)