Melhoramento de atividade e termoestabilidade de GH 62 a-L-arabinofuranosidase por evolução direcionada

• Processo: 22/04557-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 03 de outubro de 2022
• Data de Término da vigência: 02 de maio de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rosana Goldbeck Coelho
• Beneficiário: Manoela Martins
• Supervisor: Marc Ostermeier
• Instituição Sede: Faculdade de Engenharia de Alimentos (FEA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Johns Hopkins University (JHU), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 20/02871-2 - Proteína quimérica bifuncional de endoxilanase/arabinofuranosidase para hidrólise de resíduos agroindustriais e produção de xilo-oligossacarídeos, BP.DR
• Assunto(s): Engenharia de proteínas Enzimas Estabilidade térmica Aplicações industriais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: error prone PCR | protein evolution | site-directed mutagenesis | thermostability | evolução de proteína

Resumo

A termoestabilidade é um parâmetro importante para medir a viabilidade de enzimas para aplicações industriais. Geralmente, enzimas termoestáveis são mais desejáveis na indústria, pois podem se adaptar a condições adversas, diminuir o tempo de reação e reduzir o risco de contaminação microbiana. Particularmente para a despolimerização de lignocelulose, várias hemicelulases agindo sinergicamente devem apresentar boa estabilidade nas mesmas condições operacionais. No entanto, a maioria das enzimas naturais apresenta baixa termoestabilidade, o que restringe sua aplicação. A engenharia de proteínas, incluindo a evolução direcionada, é uma abordagem poderosa para melhorar as propriedades enzimáticas. Neste projeto, error prone PCR e mutagênese em cassete serão usados para construir uma biblioteca de enzimas variantes de GH 62 arabinofuranosidase. A atividade enzimática e a temperatura de fusão dos mutantes serão testadas para selecionar e analisar a sequência e estrutura das variantes que apresentam maior estabilidade. O grande interesse em melhorar a termoestabilidade de enzima GH 62 é devido à sua excelente especificidade de substrato e forte sinergismo com endoxilanases para a despolimerização de arabinoxilana, o segundo polissacarídeo mais abundante encontrado no campo agroindustrial, para aumentar a produção de xilo-oligossacarídeos prebióticos. (AU)