Papel do sistema ubiquitina proteassoma na proliferação, diferenciação e infectividade de Leishmania infantum: padronização de edição gênica por CRISPR-Cas9 em larga escala

• Processo: 23/11760-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Felipe Roberti Teixeira
• Beneficiário: Mariele Cristina de Carvalho
• Instituição Sede: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/02933-3 - Papel do sistema ubiquitina proteassoma na proliferação, diferenciação e infectividade de Leishmania infantum, AP.PNGP.PI
• Assunto(s): Leishmania infantum Complexo de endopeptidases do proteassoma Ubiquitinas CRISPR-Cas9
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: leishmania infantum | Proteassoma | Ubiquitina | CRISPR-Cas9

Resumo

O trabalho a ser desenvolvido pelo TT-4 inclui a produção de bibliotecas para sequenciamento porIllumina, análise de bioinformática e estatísticas complexas para identificação de genes relacionados ao Sistema Ubiquitina Proteassoma (SUP) responsáveis pela perda de fitness no desenvolvimento da L. infantum nas variáveis estudadas. No entanto, dada a dificuldade de selecionar estudantes de DD-FAPESP (processo de seleção aberto desde Junho 2023), este TT-4 irá iniciar os protocolos de edição gênica em larga escala, para que possamos iniciar as edições dos 91 mutantes nulos do SUP descritos no projeto PI. A Dr. Mariele está integrada em nosso grupo de pesquisa com projeto de pós-doutorado FAPESP submetido e está sendo treinada pelos estudantes do projeto e colaboradores internacionais para realização desta edição em larga escala. Após esta geração do mutantes nulos com barcode, iniciaremos as análises de bioinformática para identificação dos barcodes com perda de fitness nos ensaios de proliferação e infecção in vitro. Para isso contamos com a colaboração do Dr. Richard McCulloch e Dr Jeziel Damasceno (University of Glasgow) para o qual a estudante de DD-FAPESP Camila Rolemberg tem BEPE submetido para início em 03/2024. Lá ela irá adquirir os conhecimentos para as análises dos barcode nestas condições que serão utilizadas no projeto PI. Além destes colaboradores, contamos com a Dra. Carolina Cata-preta, co-autora do primeiro trabalho utilizando os barcodes em L.mexicana.