Análise de expressão das proteínas integrinas alfa-3 beta-1 e alfa-v beta-3 por Western Blot e por Imunofluorescência

• Processo: 24/00156-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Mara Sanches Guaragna
• Beneficiário: Heber da Silva Antonio
• Instituição Sede: Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética (CBMEG). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/10387-6 - Avaliação in vitro das consequências moleculares após overload de albumina em podócitos, AP.R
• Assunto(s): Proteinuria Nefrologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: overload de albumina | Podocitopatias | Proteinúria | Nefrologia

Resumo

Proteinúria é um problema de saúde que afeta milhões de pessoas ao redor do mundo, sendo um importante sinal e marcador deprognóstico de doença renal crônica (DRC). A presença de proteinúria geralmente é um indicativo de comprometimento naseletividade da barreira de filtração glomerular (BFG). A BFG é composta por três camadas: endotélio fenestrado, membrana basalglomerular e podócitos. Os podócitos são células altamente especializadas, cujos pedicelos interdigitam-se formando entre si osdiafragmas de fenda (SD). Os pedicelos possuem três regiões principais, chamadas de domínio SD, domínio apical de membrana(AMD) e domínio basal de membrana (AMD). Proteínas que se expressam nesses três domínios dos pedicelos possuem papelfundamental na sinalização celular e regulação da dinâmica do citoesqueleto de actina. Danos em quaisquer desses domínioslevam a uma resposta característica, com o apagamento dos pedicelos. Já se sabe que a lesão dos podócitos leva a albuminúriaprogressiva, no entanto, existem controvérsias em relação ao impacto da proteinúria para o agravamento do apagamento naspodocitopatias. Várias moléculas participam da manutenção da BFG, entre elas o canal não-seletivo receptor de cálcio TRPC6 e aproteína adaptadora CD2AP presentes no domínio SD, as integrinas 5ü35ý1 5R 5ü55ý3 no domínio BMD e a podocalixina, sialomucinade revestimento presente no AMD. Existem poucos estudos sobre as consequências moleculares resultantes da exposiçãoprolongada ao overload de albumina em podócitos humanos in vitro.O atual projeto está inserido em projeto regular Fapesp (Processo nº 2021/10387-6 - vigência 01/09/2022 a 31/08/2024): "Avaliaçãoin vitro das Consequências Moleculares após Overload de Albumina em Podócitos", cujos objetivos gerais são identificar alteraçãode expressão (tanto a nível de RNA como a nível de proteína) dos seguintes genes: TRPC6, CD2AP, ITGA3, ITGB1, ITGAV, ITGB3 ePODXL após overload de albumina em podócitos humanos sem e com dano prévio induzido com aminoglicosídeo puromicina (PAN);ainda, se houver expressão alterada, identificar a recuperação potencial do fenótipo após retirada do overload de albumina; outroobjetivo é identificar a alteração de adesão dos podócitos após overload de albumina em podócitos sem e com dano prévio comPAN, e, nas situações que tenham apresentado anormalidades de adesão, identificar potencial recuperação de adesão dos podócitosapós retirada do overload albumina. Para o atual projeto de bolsa TT-3, o objetivo è: 1) avaliar a expressão proteica e 2) a sublocalização celular das proteínasintegrinas 5ü35ý1 5R 5ü55ý3, após overload de albumina em podócitos humanos sem e com dano prévio induzido com PAN. Apartir desse estudo serão delineadas vias moleculares que poderão ser estudadas em modelo animal e utilizadas comopotenciais alvos terapêuticos contribuindo para a desaceleração da progressão da DRC em muitos pacientes.