Construção de uma biblioteca de peptídeos de endereçamento e avaliação do efeito na secreção de proteínas recombinantes em Aspergillus nidulans.

• Processo: 24/01154-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Fernando Segato
• Beneficiário: Pedro Ribeiro Faria
• Instituição Sede: Escola de Engenharia de Lorena (EEL). Universidade de São Paulo (USP). Lorena , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/07015-7 - PBIS - Plataforma Biotecnológica Integrada de Ingredientes Saudáveis, AP.NPOP
• Assunto(s): Cromóforos Expressão heteróloga Microscopia confocal Taumatina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cromóforos | expressão heteróloga | Ingredientes saudáveis | microscopia confocal | Peptídeos de endereçamento | Taumatina | Expressão heteróloga de proteínas

Resumo

Fungos filamentosos são plataformas emergentes para expressão de proteínas recombinantes de interesse biotecnológico. Suas potentes vias de secreção e poderosa maquinaria celular altamente eficiente são ferramentas que podem ser exploradas para a obtenção de múltiplas proteínas de interesse industrial e comercial. A fusão da proteína de interesse a peptídeos sinal, pré-sequências ou domínios carreadores na extremidade N-terminal das proteínas são abordagens para obtenção de proteínas recombinantes de fungos filamentosos. Essas abordagens buscam superar o desafio tecnológico de se obter proteínas recombinantes de difícil obtenção por outras vias, aumentando a secreção das proteínas sintetizadas, sem prejuízos à sua estrutura, enovelamento e outras modificações pós traducionais. A taumatina é uma proteína doce, de interesse das indústrias de alimentos e farmacêutica, notavelmente problemática em sua obtenção por vias tradicionais, exigindo grandes quantidades de frutos da Thaumatococcus danielli para se obter miligramas da proteína. Dessa forma, o desenvolvimento de uma plataforma biotecnológica para obtenção da proteína por via recombinante torna-se muito atrativa. A expressão heteróloga da taumatina já foi explorada por outros grupos, resultando em baixos rendimentos da proteína recombinante. No entanto, existem indicações de uma possível relação entre a pré-sequência nativa da taumatina, sua integridade, e secreção em sistemas recombinantes. A investigação dessa relação e a investigação da influência das sequências de endereçamento na secreção de proteínas funcionais é o objetivo deste trabalho. Para isso serão fusionados cromóforos fluorescentes à taumatina recombinante, utilizando o fungo filamentoso Aspergillus nidulans como plataforma de expressão modelo biotecnológica. Essa abordagem busca elucidar a síntese, trânsito, integridade, empacotamento e secreção da taumatina, investigando também diferentes sequências de endereçamento, possibilitando a construção de uma biblioteca de sequências de endereçamento, que podem ser desenvolvidos em produtos comerciais e aplicados em fungos filamentosos.